Name: Labeling and Staining Rat Brain Pericytes for Fluorescent Imaging
Uploaded: 2023-08-18T15:00:00
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labeling and staining rat brain pericytes for fluorescent imaging

Visualisation de la contractilité des péricytes cérébraux après l’hémorragie sous-arachnoïdienne

Brain pericytes, distinguished by their slender protuberances and protruding cell bodies, encircle the microcirculation1,2. While cerebral blood flow augmentation is predominantly driven by capillary dilation, smaller arteries exhibit slower rates of dilation3. Pericyte contractility exerts influence over capillary diameter and pericyte morphology, impacting vascular dynamics4. Contraction of brain pericytes leads to capillary constriction, and in pathological scenarios, excessive contraction may impede erythrocyte flow5. Various factors, including norepinephrine released from the locus coeruleus, can induce brain pericyte contraction within capillaries6. With a regulatory role in cerebral blood flow, pericytes exhibit 20-HETE synthesis, serving as an oxygen sensor during hyperoxia7. Oxidative-nitrative stress-triggered contraction of brain pericytes detrimentally affects capillaries5. Despite both in vivo and ex vivo investigations into brain pericyte contraction8, limited knowledge persists regarding the imaging of viable and non-viable brain pericytes within brain slices.
Crucially, post-tissue fixation imaging of brain pericytes compromises their vitality and subsequent contractility assessment. Moreover, in scenarios such as neurological disorders (e.g., subarachnoid hemorrhage - SAH), transgenic labeling of brain pericytes fails to differentiate between viable and non-viable pericytes, as confirmed by our preliminary SAH-induced brain pericyte death study9. 
To surmount these challenges, we employed TO-PRO-3 to label live pericytes, while deceased ones were stained with propidium iodide (PI). We used high-resolution confocal imaging technologies to visualize viable and non-viable brain pericytes in brain slices while preserving slice activity during imaging. This article aims to present a reproducible method for imaging viable and non-viable brain pericytes in brain slices, serving as a valuable tool to probe the impact of brain pericytes on cerebral microcirculation post SAH.

Pleins feux sur l’auteur : Imagerie des péricytes post-hémorragie sous-arachnoïdienne chez les rongeurs 

Imagerie des péricytes cérébraux vitaux et non vitaux dans des coupes de cerveau après une hémorragie sous-arachnoïdienne

Our study showed a significant increase in pericytes deaths. So starting at a sick horse after SAH, it demonstrated a positive correlation between the number of low vital parasites and the time elapsed after SAH. Imaging vital and the non-vital brain parasites in brain slices following SAH and the parasite isolation techniques, have advanced the research in my field.Currently, it's quite difficult to fully distinguish between dead parasites and dead endothelial cells. Our study find contraction-dependent apoptosis in parasites after SAH. We have developed a very reliable protocol, which enables the fluorescent labeling, both functional and a non-functional brain parasite in brain sections, and the same time.

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Labeling and Staining Rat Brain Pericytes for Fluorescent Imaging  

Marquage et coloration des péricytes cérébraux de rat pour l’imagerie fluorescente

Pour marquer les péricytes, ajoutez le colorant fluorescent TO-PRO-3 au liquide céphalo-rachidien artificiel ou ACSF. Maintenant, incubez le cerveau de rat fraîchement tranché dans l’ACSF chargé de colorant pendant 20 minutes dans un environnement sombre à température ambiante. Ensuite, transférez la crépine en nylon avec les tranches de cerveau dans une chambre de rinçage à plaque à six puits.Laissez reposer les tranches de cerveau dans la chambre pendant 10 minutes. Pour marquer les péricytes non vitaux, incuber les tranches de cerveau marquées TO-PRO-3 dans de l’isolectine B4 conjuguée à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes dans l’obscurité. Après incubation, rincez les tranches de cerveau dans du liquide céphalo-rachidien artificiel pendant 15 minutes.Ensuite, placez les tranches de cerveau dans de l’ACSF gazé avec 5% de dioxyde de carbone et 95% d’oxygène. À cela, ajoutez de l’iodure de propidium à une concentration de 37 micromolaires à 37 degrés Celsius. Pour arrêter l’absorption du colorant et minimiser l’étiquetage de fond, rincez les préparations pendant 15 minutes dans ACSF.Dans des conditions physiologiques normales, les péricytes cérébraux ne subissent pas de mort cellulaire. Des péricytes viables qui n’ont pas été colorés à l’iodure de propidium ont été détectés. Les modèles d’HSA devraient vitaliser les péricytes au sein de la microvascularisation.Des péricytes non vitaux ont également été détectés. Les péricytes non vitaux marqués à l’iodure de propidium sont restés attachés à l’ensemble de la microvascularisation.

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JoVE Journal

Neuroscience

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Recherche

Neurosciences

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