Name: Confocal Imaging of Vital and Non-Vital Pericytes in Rat Acute Brain Slices
Uploaded: 2023-08-18T15:00:00
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confocal imaging of vital and non-vital pericytes in rat acute brain slices

Visualisation de la contractilité des péricytes cérébraux après l’hémorragie sous-arachnoïdienne

Brain pericytes, distinguished by their slender protuberances and protruding cell bodies, encircle the microcirculation1,2. While cerebral blood flow augmentation is predominantly driven by capillary dilation, smaller arteries exhibit slower rates of dilation3. Pericyte contractility exerts influence over capillary diameter and pericyte morphology, impacting vascular dynamics4. Contraction of brain pericytes leads to capillary constriction, and in pathological scenarios, excessive contraction may impede erythrocyte flow5. Various factors, including norepinephrine released from the locus coeruleus, can induce brain pericyte contraction within capillaries6. With a regulatory role in cerebral blood flow, pericytes exhibit 20-HETE synthesis, serving as an oxygen sensor during hyperoxia7. Oxidative-nitrative stress-triggered contraction of brain pericytes detrimentally affects capillaries5. Despite both in vivo and ex vivo investigations into brain pericyte contraction8, limited knowledge persists regarding the imaging of viable and non-viable brain pericytes within brain slices.
Crucially, post-tissue fixation imaging of brain pericytes compromises their vitality and subsequent contractility assessment. Moreover, in scenarios such as neurological disorders (e.g., subarachnoid hemorrhage - SAH), transgenic labeling of brain pericytes fails to differentiate between viable and non-viable pericytes, as confirmed by our preliminary SAH-induced brain pericyte death study9. 
To surmount these challenges, we employed TO-PRO-3 to label live pericytes, while deceased ones were stained with propidium iodide (PI). We used high-resolution confocal imaging technologies to visualize viable and non-viable brain pericytes in brain slices while preserving slice activity during imaging. This article aims to present a reproducible method for imaging viable and non-viable brain pericytes in brain slices, serving as a valuable tool to probe the impact of brain pericytes on cerebral microcirculation post SAH.

Pleins feux sur l’auteur : Imagerie des péricytes post-hémorragie sous-arachnoïdienne chez les rongeurs 

Imagerie des péricytes cérébraux vitaux et non vitaux dans des coupes de cerveau après une hémorragie sous-arachnoïdienne

Our study showed a significant increase in pericytes deaths. So starting at a sick horse after SAH, it demonstrated a positive correlation between the number of low vital parasites and the time elapsed after SAH. Imaging vital and the non-vital brain parasites in brain slices following SAH and the parasite isolation techniques, have advanced the research in my field.Currently, it's quite difficult to fully distinguish between dead parasites and dead endothelial cells. Our study find contraction-dependent apoptosis in parasites after SAH. We have developed a very reliable protocol, which enables the fluorescent labeling, both functional and a non-functional brain parasite in brain sections, and the same time.

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Confocal Imaging of Vital and Non-Vital Pericytes in Rat Acute Brain Slices  

Imagerie confocale des péricytes vitaux et non vitaux dans des coupes de cerveau aiguës de rat

Pour commencer, utilisez une pipette Pasteur en plastique pour transférer délicatement les tranches de cerveau colorées par fluorescence dans des boîtes confocaux à fond en verre. Remplissez ces plats d’ACSF équilibré. À l’aide d’un treillis de fer, fixez les tranches de cervelle de rat en place.Ensuite, placez les boîtes confocaux à fond de verre sur la platine d’un microscope confocal. Positionnez la tranche de cerveau aiguë au fond de la boîte et perfusez avec l’ACSF équilibrant pendant l’imagerie. À l’aide de l’objectif 40X, visualisez les cellules de la paroi de la microvascularisation corticale cérébrale.Ensuite, utilisez un logiciel compatible pour capturer des piles d’images. Identifiez la microvascularisation cérébrale et les péricytes en fonction de leur réseau et de leur morphologie, puis localisez une région spécifique contenant un réseau de microvascularisation cérébrale sur chaque tranche de cerveau et capturez des images. Dans des conditions physiologiques normales, les péricytes cérébraux ne subissent pas de mort cellulaire.Des péricytes viables qui n’ont pas été colorés à l’iodure de propidium ont été détectés. Les modèles SAH ont montré des péricytes vitaux dans la microvascularisation. Des péricytes non vitaux ont également été détectés.L’iodure de propidium marqué péricytes non vitaux est resté détaché de l’ensemble de la microvascularisation.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Confocal Imaging of Vital and Non-Vital Pericytes in Rat Acute Brain Slices

Imaging Vital and Non-vital Brain Pericytes in Brain Slices following Subarachnoid Hemorrhage

Pericytes are crucial mural cells situated within cerebral microcirculation, pivotal in actively modulating cerebral blood flow via contractility ...

Recherche

Neurosciences

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Labeling and Staining Rat Brain Pericytes for Fluorescent Imaging

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