Snijd om te beginnen voorzichtig de huid van de geofferde muis in, beginnend bij de opening van de schedel en zich uitstrekkend naar het frontale gebied. Gebruik een schaar om de schedel voorzichtig op te tillen en te verwijderen zonder de leptomeninges te beschadigen, waarbij de hele hersenen worden verzameld. Dompel de hele hersenen onder in de wasbuffer en spoel deze voorzichtig door om het oppervlaktebloed te verwijderen.
Breng de hersenen over in een steriele petrischaal zonder te hakken. Gebruik vervolgens onder een microscoop een pincet met een fijne punt om de leptomeninges uit het hersenoppervlak te halen. Knip met een steriele microschaar het leptomeningesweefsel in fragmenten.
Repareer het spijsverteringsenzymmengsel met behulp van de gegeven componenten. Voeg 10 milliliter mix toe aan de fragmenten en incubeer gedurende 15 minuten bij 37 graden Celsius. Schud voorzichtig om de fragmenten los te maken van de bodem van de buis.
Voeg vervolgens 10 milliliter stopbuffer toe. Centrifugeer de suspensie bij 300 g gedurende vijf minuten bij vier graden Celsius. En gebruik een pipet om het supernatant voorzichtig te verwijderen.
Voeg 10 milliliter koude PBS toe en filter eventuele klonten door een zeef van 70 micron in een steriele buis van 50 milliliter. Plaat 10 tot de vijfde cellen per vierkante centimeter in een met fibronectine gecoate T25-kolf met vijf milliliter kweekmedium en incubeer bij 37 graden Celsius met 5% koolstofdioxide gedurende 24 uur. Vervang het medium na incubatie door een nieuw medium om niet-gehechte cellen te verwijderen.