Iniziare trasferendo la sospensione di cellule tumorali pancreatiche precedentemente scongelate in una provetta da microcentrifuga da due millilitri e aggiungere PBS per raggiungere un volume finale di due millilitri. Quindi, utilizzare un emocitometro per valutare la quantità e la qualità delle cellule. Una volta ottenuto il pellet cellulare attraverso la centrifugazione, utilizzando puntali per pipette progressivamente più piccoli, decantare accuratamente il surnatante per ridurre al minimo la distribuzione del pellet massimizzando il fluido decantato.
Preparare il tampone di lisi cellulare 1X, quindi aggiungerne 100 microlitri a 900 microlitri di tampone di diluizione per lisi cellulare precedentemente preparato per ottenere un tampone di lisi cellulare 0,1X. Trasferire 100 microlitri di tampone di lisi cellulare 0,1X refrigerato al pellet cellulare e pipettare delicatamente cinque volte per garantire la completa rispensione. Dopo l'incubazione su ghiaccio per tre minuti, aggiungere un millilitro di tampone di lavaggio refrigerato al pellet risospeso e pipettarlo delicatamente cinque volte.
Dopo la centrifugazione, scartare il surnatante come dimostrato e ripetere questo processo di lavaggio altre due volte. Caricare la sospensione colorata di blu di tripano in un emocitometro per contare il numero di nuclei. Risospendere il pellet di nuclei in un tampone di nuclei 1X in base al recupero dei nuclei mirato.
Far passare con cautela i nuclei risospesi attraverso un colino per celle con punta di pipetta da 40 micrometri, quindi mantenerlo sul ghiaccio. Ora contate i nuclei. I nuclei ottenuti con questo metodo hanno mostrato dimensioni e forma appropriate.
Occasionalmente si può osservare una lieve punteggiatura dell'involucro nucleare che deve essere monitorata durante la valutazione nucleare finale tramite emocitometro.