للبدء ، ضع جهاز القناة الهضمية على رقاقة في فرن جاف على 60 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة للتخلص من الرطوبة. ثم باستخدام مولد الأوزون للأشعة فوق البنفسجية ، قم بتعريض الجهاز للأشعة فوق البنفسجية والأوزون لمدة 60 دقيقة. قم بتأمين أنبوب المدخل والتجاوز والمخرج للقناة الدقيقة العلوية باستخدام مشابك الموثق.
قم بزرع أنبوب المدخل للقناة الدقيقة السفلية ، ثم افصل أنبوب المخرج عن القناة الدقيقة السفلية. تأكد من أن الأنبوب الجانبي للقناة الدقيقة السفلية يظل مفتوحا. باستخدام ماصة P100 الدقيقة ، أضف 100 ميكرولتر من محلول بولي إيثيلينيمين 1٪ من خلال فتحة مخرج القناة الدقيقة السفلية.
أعد توصيل أنبوب المخرج للقناة الدقيقة السفلية. قم بتأمين ممر المدخل وأنبوب المخرج للقناة الدقيقة السفلية ، متبوعا بأنبوب المدخل للقناة الدقيقة العلوية باستخدام مشابك الموثق. الآن افصل أنبوب المخرج للقناة الدقيقة العلوية ، مما يضمن بقاء الأنبوب الجانبي مفتوحا.
بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من محلول بولي إيثيلينيمين 1٪ من خلال فتحة مخرج القناة الدقيقة العلوية. أعد توصيل أنبوب مخرج القناة الدقيقة العلوية واترك الجهاز يحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. كرر الإجراء مع 0.1٪ جلوتارالدهيد ، ثم بالماء منزوع الأيونات لإزالة أي محلول تنشيط سطحي زائد.
جفف الشريحة طوال الليل عند 60 درجة مئوية في الفرن. في اليوم التالي ، أخرج الشريحة من الفرن واتركها لتبرد في خزانة السلامة الحيوية لمدة 10 دقائق. قم بتأمين أنبوب المدخل والتجاوز والمخرج للقناة الدقيقة العلوية ، بما في ذلك أنبوب مدخل القناة الدقيقة السفلية باستخدام مشابك الموثق.
افصل أنبوب المخرج للقناة الدقيقة السفلية. أضف 20 ميكرولترا من المصفوفة خارج الخلية ، أو خليط ECM ، من خلال فتحة مخرج القناة الدقيقة السفلية. ثم أعد توصيل أنبوب المخرج للقناة الصغيرة السفلية.
قم بتأمين أنبوب المدخل والتجاوز والمخرج للقناة الدقيقة السفلية ، بما في ذلك أنبوب مدخل القناة الدقيقة العلوية بمشابك الموثق. بعد فصل أنبوب المخرج للقناة الدقيقة العلوية ، أضف 20 ميكرولترا من خليط VCM من خلال فتحة مخرج القناة الدقيقة العلوية. أعد توصيل أنبوب مخرج القناة الدقيقة العلوية ثم قم بإزالة مشبك الموثق من أنبوب مخرج القناة السفلية ، مع التأكد من فتح كلا أنبوبي المخرج.
ضع الشريحة في حاضنة 37 درجة مئوية 5٪ من ثاني أكسيد الكربون لمدة ساعة واحدة.
