Til at begynde med skal du placere gut-on-a-chip-enheden i en tør ovn indstillet til 60 grader Celsius i 30 minutter for at fjerne fugt. Brug derefter en UV-ozongenerator til at udsætte enheden for UV- og ozonbehandling i 60 minutter. Fastgør indløbs-, bypass- og udløbsslangen på den øverste mikrokanal ved hjælp af bindeclips.
Plant indløbsslangen til den nederste mikrokanal, og frakobl derefter udløbsslangen til den nederste mikrokanal. Sørg for, at bypassslangen i den nedre mikrokanal forbliver åben. Brug en P100-mikropipette til at tilsætte 100 mikroliter af en 1% polyethylenaminopløsning gennem udløbshullet i den nedre mikrokanal.
Tilslut udløbsslangen til den nederste mikrokanal igen. Fastgør indløbsbypass og udløbsrør på den nedre mikrokanal, efterfulgt af indløbsslangen til den øvre mikrokanal ved hjælp af bindeclips. Afbryd nu udløbsslangen til den øverste mikrokanal, og sørg for, at bypass-slangen forbliver åben.
Derefter tilsættes 100 mikroliter af en 1% polyethylenaminopløsning gennem udløbshullet i den øvre mikrokanal. Sæt udløbsslangen på den øvre mikrokanal på igen, og lad enheden inkubere ved stuetemperatur i 10 minutter. Gentag proceduren med 0,1% glutaraldehyd og derefter med deioniseret vand for at fjerne overskydende overfladeaktiveringsopløsning.
Tør chippen natten over ved 60 grader Celsius i en ovn. Den næste dag skal du fjerne chippen fra ovnen og lade den køle af i et biosikkerhedsskab i 10 minutter. Fastgør indløbs-, bypass- og udløbsslangen på den øvre mikrokanal, inklusive indløbsslangen til den nedre mikrokanal ved hjælp af bindeclips.
Afbryd udløbsslangen til den nederste mikrokanal. Tilsæt 20 mikroliter ekstracellulær matrix eller ECM-blanding gennem udløbshullet i den nedre mikrokanal. Sæt derefter udløbsslangen på igen til den nederste mikrokanal.
Fastgør indløbs-, bypass- og udløbsslangen på den nedre mikrokanal, inklusive indløbsslangen til den øvre mikrokanal med bindeclips. Efter frakobling af udløbsslangen til den øvre mikrokanal tilsættes 20 mikroliter VCM-blanding gennem udløbshullet i den øvre mikrokanal. Sæt udløbsslangen på den øverste mikrokanal på igen, og fjern derefter bindeclipsen fra udløbsslangen i den nederste kanal, og sørg for, at begge udløbsrør er åbne.
Placer chippen i en 37 grader Celsius 5% kuldioxidinkubator i en time.