시작하려면 10 마이크로몰 Y-27632 및 2.5 마이크로몰 CHIR-99021을 포함하는 오가노이드 배양 배지를 준비합니다. ECM을 gut-on-a-chip에 코팅한 후 상부 마이크로 채널의 바이패스 튜브를 열어 둔 상태에서 상부 마이크로 채널에서 출구 튜브를 분리합니다. 바인더 클립을 사용하여 하부 마이크로채널의 입구와 출구를 모두 고정합니다.
P100 마이크로피펫을 사용하여 20마이크로리터의 셀 현탁액을 상부 마이크로채널의 출구 구멍에 추가합니다. 바인더 클립을 사용하여 상부 마이크로채널의 바이패스와 입구 튜브를 고정합니다. 출구 튜브를 상부 마이크로 채널의 출구 구멍에 다시 부착하여 튜브가 공정 내내 열린 상태로 유지되도록 합니다.
완료되면 바인더 클립을 사용하여 상부 마이크로 채널의 출구 튜브를 점차적으로 고정합니다. 다음으로, 현미경으로 세포가 상부 마이크로 채널 전체에 고르게 분포되어 있는지 확인합니다. gut-on-a-chip 장치와 가습 이산화탄소 인큐베이터를 섭씨 37도에 놓습니다.
칩의 상부 마이크로채널에 부착된 주사기를 인큐베이터 내에 있는 주사기 펌프에 연결합니다. 유속을 시간당 30마이크로리터로 설정하고 상부 마이크로채널에 대한 안착 매체의 연속 흐름을 시작합니다. 이 기간 동안 하단 마이크로채널 cl을 고정된 상태로 둡니다.
착석 다음날 배지를 A-83-01만 함유된 오가노이드 배양 배지로 교체합니다. 상부 마이크로채널에 대해 단층이 설정되면 하부 마이크로채널로의 연속 안착 매체 흐름을 시작합니다. 다음으로, 오가노이드 배양 배지를 상부 및 하부 마이크로 채널 모두에 도입하여 칩에서 3차원 형태 형성의 개발을 시작합니다.
유속을 시간당 50마이크로리터로 높여 gut-on-a-chip 설계에서 제곱센티미터당 0.02dine의 순전한 응력을 달성합니다. 컴퓨터 조절 바이오리액터를 사용하여 gut-on-a-chip 장치에서 2-3일 동안 배양된 세포에 10% 순환 변형률과 0.15헤르츠 주파수를 적용하여 3차원 형태 형성을 확립합니다. 6-9일간의 중간 흐름 후, 개의 장 상피 세포의 3차원 형태 형성의 간헐적인 클러스터링이 마이크로채널 전체에 걸쳐 관찰되었습니다.
면역형광 염색은 미세유체 칩에서 오가노이드 유래 단층과 융모 유사 구조의 3차원 구조를 평가했습니다. TEER로 측정한 장벽 기능은 배양 5일째에 안정적인 TEER 값을 보여주었습니다.