Comece preparando as células endoteliais diferenciadas, parasitas e astrócitos para a montagem do modelo iBBB. Depois de aspirar o meio de cultura celular das células endoteliais diferenciadas, lavar as células com PBS uma vez, adicionar uma mistura de protease colagenase às células lavadas e dissociar as células a 37 graus Celsius por cinco minutos. Transferir a mistura de colagenase protease com as células dissociadas para um tubo cônico contendo hECSR, mantendo uma proporção de 1:3 da mistura para hECSR, em seguida, centrifugar as células a 300 G por três minutos e aspirar o sobrenadante antes de ressuspender o pellet celular resultante no hECSR.
Dissociar os parasitas diferenciados com a mistura de protease colagenase a 37 graus Celsius por cinco minutos. Adicionar a quantidade adequada de N2B27 em um tubo cônico e transferir as células dissociadas da mistura de colagenase protease para ele, mantendo uma proporção de 1:3 da mistura para N2B27. Gire as células a 300 G por três minutos.
Após aspirar o sobrenadante, ressuspender o pellet de células em N2B27. Dissociar os astrócitos diferenciados com a mistura de protease colagenase a 37 graus Celsius por cinco minutos. Transferir as células dissociadas na mistura de colagenase protease para um tubo cônico contendo meio astrócito completo na proporção de 1:3 da mistura para o meio.
Após centrifugar as células a 300 G por três minutos, aspirar o sobrenadante e ressuspender o pellet celular em meio astrócito completo. As células já estão prontas para montar o iBBB.