Name: Dissection and Removal of the Temporal Bone to Collect Auditory Epithelia from Newborn Mice
Uploaded: 2023-09-15T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Removal of the Temporal Bone to Collect Auditory Epithelia from Newborn Mice at JoVE.com

dissection and removal of the temporal bone to collect auditory epithelia from newborn mice

טיפוח יעיל במבחנה של תאי שיער של שבלול העכבר

Cochlear hair cells play important roles in sound detection and signal transmission to the auditory nerve. Hair cells are mechanistic cells that function as primary sensory receptors and convert sound vibrations into electrical signals in vertebrates. The sensory epithelium of the mammalian inner ear comprises a single row of inner hair cells and three rows of outer hair cells. In different basic membrane areas, hair cells perceive sounds at different frequencies (between 20 and 2,000 Hz)1. The function of outer hair cells is an active mechanical amplification process that helps fine-tune the mammalian inner ear, conferring high sensitivity to sound. Inner hair cells are responsible for detecting sounds. After graded depolarization, acoustic information is transmitted to the brain through the auditory nerve fibers2.
Hearing loss may be caused by genetic defects, aging, noise trauma, or the excessive use of ototoxic drugs, which constitute a major health concern worldwide3,4. Hearing loss mainly results from irreversible damage to hair cells5. Regarding noise-induced hearing loss, although researchers have reached a consensus on several details of its etiology, a comprehensive understanding of the numerous underlying mechanisms is lacking. Outer hair cells are particularly vulnerable to acoustic overexposure6. Mechanosensitive cochlear hair cells are involved in age-related hearing loss; however, the molecular and cellular mechanisms underlying hair cell degeneration remain unknown. Several changes in the molecular processes lead to hair cell aging, oxidative stress, DNA damage response, autophagy, and dysregulation of the expression and transcription of genes related to hair cell specialization7.
As the inner ear is encased in the temporal bone, deep in the hardest bone of the body, it is experimentally inaccessible, posing a challenge to investigations into the mechanisms of hair cell repair and regeneration. Hence, establishing in vitro cultures for investigating the function of hair cells has become an ideal method for research on the regeneration and injury mechanisms of the inner ear. The procedures for preparing cochlear organotypic cultures have been described in earlier studies8,9,10. Investigators worldwide have employed various cochlear microdissection and surface preparation techniques. Despite the persistent challenges, various primary hair cell culture systems have been successfully established in vitro. Cochlear organ cultures contain various cell types, including hair cells, Deiters cells, Hensen&#39;s cells, pillar cells, and auditory nerve fibers. An in-depth understanding of the changes in hair cells at the cellular and molecular levels after injury will enable the development of more powerful research tools. This study aimed to demonstrate the steps for isolating cochlear organs from neonatal mice and enzymatically detaching the abundant hair cells for in vitro studies. The nature of the cultured cells was confirmed using immunofluorescence staining.

מחבר זרקור: התקדמות בטיפוח תאי שיער של עכברים למחקר שמיעתי 

בידוד ותרבית של תאי שיער שבלול ראשוניים מעכברי יילודים

The inner ear is encased in the temporal bone, deep in the hardest bone of the body, posing a challenging to investigations. The cultivation of primary hair cells is indispensable for investigating cochlear hair cells. This study aimed to discover a method for isolating and cultivating mouse hair cells.We demonstrate the steps for isolating cochlear organs from your natural mice and asymmetrically detaching the abundant hair cells for in-vitro studies. The nature of the cultured cells, was confirmed using immunofluorescence staining. There are three primary culture method established by isolating living cells from cochlear organs, and immediately coaching them, pair to be a valuable tool for extensive research, are all three system.This method can enhance our understanding of the biological characteristics of in-vivo cultured hair cells, and demonstrate the efficiency of cochlear hair cell cultures, establishing a solid methodological foundation for further auditory research.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Removal of the Temporal Bone to Collect Auditory Epithelia from Newborn Mice at JoVE.com

Dissection and Removal of the Temporal Bone to Collect Auditory Epithelia from Newborn Mice  

דיסקציה והסרה של העצם הרקתית לאיסוף אפיתליה שמיעתית מעכברים שזה עתה נולדו

כדי להתחיל, החזיקו היטב את ראשם של העכברים שזה עתה נולדו במקומם. בעזרת מספריים במיקרו ניתוח, לפתוח את הקרקפת לאורך התפר sagittal. לאחר מכן, להפריד ולשתק את הקרקפת באופן דו צדדי עם האצבעות.השתמש במספריים כדי לחתוך את הגולגולת ולהפוך אותה קדימה כדי לגשת לגולגולת. השתמש במעלית פריאוסטלית קטנה כדי לחלץ את המוח ולאחר מכן השתמש בקצה המספריים כדי לגרד בעדינות את המוח, חושף את בסיס הגולגולת. כעת, בחנו את העצמות הרקתיות הדו-צדדיות בבסיס הגולגולת.השתמשו במספריים כדי לחרוט את בסיס הגולגולת לאורך קו האמצע. לאחר מכן, לגרד את העור ולחסל כל עצם מיותרת. משמרים ומעבירים את העצמות הטמפורליות לצלחות פטרי סטריליות בקוטר 35 מ"מ מלאות ב-HBSS טרי.לאחר מכן, השתמש בזוג של 5 מלקחיים מחודדים כדי לסלק את הבולה ואת הרקמה שמסביב מהחלק הפטרוסי של העצם הרקתית. החזיקו את המלקחיים ביד אחת כדי לייצב את החלק החצי עגול של העצם הרקתית. השתמש ביד השנייה כדי להחדיר את הקצה התחתון של המלקחיים לתוך גומחת החלון העגולה, המפריד בין העצם הצידית של השבלול לבין קנה המידה של הפרוזדור.בזהירות להסיר את החלק petrous של העצם הטמפורלית מבלי ליצור קשר עם איבר של אפיתל Corti. לאחר מכן, נתקו בקפדנות וחילצו את המבוך הגרמי של השבלול, החל מהבסיס ועד לקצה האפיקאלי. באמצעות 5 מלקחיים מחודדים, בזהירות מיקרו לבודד את אפיתל החושים של איבר קורטי מן modiolus.לאחר מכן, השתמשו במלקחיים מיקרו-ניתוחיים כדי להחזיק את הרצועה הספירלית, ולהפריד אותה בעדינות מהסטריה וסקולריס. מעבירים את אפיתל השמע הנקי, באמצעות פיפטה של 200 מיקרוליטר, לצלחת תרבית סטרילית בקוטר שלושה מילימטר המכילה HBSS. הניחו את אפיתל השמע המבודד בצלחת פטרי סטרילית בקוטר 100 מ"מ מלאה ב-HBSS לשלבי ההכנה הבאים.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and Removal of the Temporal Bone to Collect Auditory Epithelia from Newborn Mice

Isolation and Culture of Primary Cochlear Hair Cells from Neonatal Mice

Cochlear hair cells are the sensory receptors of the auditory system. These cells are located in the organ of Corti, the sensory organ responsible for ...