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02:13 min
November 10th, 2023
DOI :
10.3791/200701-v
* These authors contributed equally
Transcript
首先,将间充质干细胞接种到T-75烧瓶,100mm培养皿和两个48孔板中,用于所有实验。将 200 微升 10%MSC 培养基加入 48 孔板的孔中。当细胞单层达到90%汇合度时,用2%血清培养基代替指定对照孔的现有培养基。
将成脂或成骨谱系的分化培养基添加到最后两个标有测试的孔中。在同一天,胰蛋白酶消化汇合的100mm培养皿,并将细胞悬液转移到两个标记的15毫升管中。将试管以300×g离心6分钟。
然后将 2 毫升相应培养基移液到对照管和试管中。将松散的管子放入 37 摄氏度、5% 二氧化碳下的培养箱中 21 天,每三天更换一次培养基。用标准免疫荧光法对SHED进行表征,显示波形蛋白、肌动蛋白丝和DAPI染色的细胞核的表达。
短期细胞生长试验显示,从第2天到第8天,增殖速率增加。菌落形成单位测定和结晶紫染色证实了 14 天后 SHED 的集落形成能力。
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