Name: Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis
Uploaded: 2023-09-22T14:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis at JoVE.com

acquisition and pre-processing of nasal mucosal samples from rats with allergic rhinitis

אימונופלואורסנציה צבעונית של רקמת האף במודל חולדה נזלת אלרגית

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE)1,2. It is characterized by symptoms such as sneezing, a runny nose, nasal congestion, and nasal itching. With industrialization and urbanization, the prevalence of AR is gradually increasing, affecting approximately 10%-20% of the world&#39;s population1. The immunofluorescence (IF) technique is a fluorescent staining method that utilizes an antibody-antigen binding reaction. It can be employed to detect and quantify the distribution and expression levels of specific proteins in biological tissues or cells. In AR research, IF can simultaneously detect multiple targets, including AR-related cytokines, inflammatory cells, receptors, and more, facilitating the exploration of AR pathogenesis and the effects of drugs3,4,5,6.
The multicolor immunofluorescence (mIF) staining process closely resembles traditional IF, with the addition of an antibody elution step during each round of staining. This modification enables the simultaneous detection of multiple biomarkers on the same tissue section through sequential single-labeling and multiple rounds of re-staining. mIF is based on tyramide signal amplification (TSA), allowing for repeated cycles of TSA fluorescent staining and the use of microwave heating to remove antibodies while retaining fluorescent signals7,8. In comparison to conventional IF, mIF offers several advantages: (1) it can detect weakly expressed antigens that are challenging to identify with conventional IF9,10; (2) it provides high-quality staining with an improved signal-to-noise ratio; (3) it allows for the quantification of tissue-specific structures and regions of interest11; (4) multiplexing multiple pathways efficiently utilizes tissues and conserves limited pathological resources12; (5) multi-parameter analysis through mIF offers deeper insights into tissues, uncovering hidden biological information13.
Overall, mIF allows the observation of different antigen expressions and distributions within the same sample, facilitating the study of target proteins. In the future, researchers seeking to understand the expression and distribution of multiple target proteins will find this technique a valuable choice. This study demonstrates the application of mIF for staining nasal mucosa samples from rats with AR and evaluate the establishment of a rat model of AR.

מחבר זרקור: קידום מחקר נזלת אלרגית עם immunofluorescence צבעוני

תיוג אימונופלואורסצנטי בחלקי רקמת רירית האף של חולדות נזלת אלרגיות באמצעות בדיקה חיסונית צבעונית

Our main research is based on a study of allergic rhinitis. Our research intends to analyze what proteins are associated with allergic rhinitis. Multicolor immunofluorescence is currently used to advance research in our field.In future studies, we will focus on the possible mechanisms of TCM in the treatment of allergic rhinitis.

Watch this Scientific Journal Video about Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis at JoVE.com

Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis  

רכישה ועיבוד מקדים של דגימות רירית האף מחולדות עם נזלת אלרגית

כדי להתחיל, עם אזמל, לעשות חתך מדויק לאורך שתי פינות הפה של חולדה מורדמת לחשוף את רקמת השריר. השתמש זוג מספריים רקמות לחתוך את המפרקים של העצם זיגומטית ואת הלסת משני צידי הגולגולת. לאחר מכן להסיר את הלסת התחתונה.השתמש מספריים רקמות לחתוך את החיבור הגרמי בין חלל האף לבין מקסילה. לאחר מכן השתמש hemostat כדי להפריד את העור של maxilla לחשוף את חלל האף. לנתק את החיבור בין חלל האף לבין עצמות המסלול משני הצדדים בפתח האינפרא-אורביטלי, ולהסיר את חלל האף.מניחים את חלל האף המופק בתמיסת פרפורמלדהיד 4% לקיבוע. כדי להסיר את הרקמה, לשטוף את הרקמה קבועה עם מים מזוקקים. הניחו את הרקמות בתמיסת הסתיידות עם נפח גדול פי 20 עד פי 30 מזה של הרקמות בטמפרטורת החדר.לאחר השלמת ההסתיידות, הניחו את הרקמה בקופסת התייבשות. מעבירים את קופסת ההתייבשות למייבש ומייבשים את הרקמה בריכוז אלכוהול עולה בזמני דגירה שונים. לאחר מכן, מניחים את הרקמה באתנול נטול מים במשך 30 דקות במשך שני מחזורים.לאחר מכן, להעביר את הרקמה xylene במשך חמש עד 10 דקות וחזרה, ולאחר מכן לטבול את הרקמה בשעווה במשך שעה אחת. מניחים את גוש השעווה בקלטות הטבעה. הסירו את קוביות השעווה לאחר שהתמצקו וקצצו את גוש השעווה.מכניסים את גוש השעווה החתוך למיקרוטום פרפין וחותכים אותו לשלוש פרוסות בעובי מיקרומטר. צביעת המטוקסילין ואאוזין של חולדות הביקורת הראתה מסודרת היטב וריסונים. רירית מחיצת האף נפגעה והתנתקה בקבוצת המחלה עם חדירת נויטרופילים בולטת.

Research

JoVE Journal

Medicine

Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis

Immunofluorescent Labeling in Nasal Mucosa Tissue Sections of Allergic Rhinitis Rats via Multicolor Immunoassay

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa, primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE), ...