Name: Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis
Uploaded: 2023-09-22T14:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis at JoVE.com

acquisition and pre-processing of nasal mucosal samples from rats with allergic rhinitis

Allerjik rinit sıçan modelinde burun dokusunun çok renkli immünofloresanı

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE)1,2. It is characterized by symptoms such as sneezing, a runny nose, nasal congestion, and nasal itching. With industrialization and urbanization, the prevalence of AR is gradually increasing, affecting approximately 10%-20% of the world&#39;s population1. The immunofluorescence (IF) technique is a fluorescent staining method that utilizes an antibody-antigen binding reaction. It can be employed to detect and quantify the distribution and expression levels of specific proteins in biological tissues or cells. In AR research, IF can simultaneously detect multiple targets, including AR-related cytokines, inflammatory cells, receptors, and more, facilitating the exploration of AR pathogenesis and the effects of drugs3,4,5,6.
The multicolor immunofluorescence (mIF) staining process closely resembles traditional IF, with the addition of an antibody elution step during each round of staining. This modification enables the simultaneous detection of multiple biomarkers on the same tissue section through sequential single-labeling and multiple rounds of re-staining. mIF is based on tyramide signal amplification (TSA), allowing for repeated cycles of TSA fluorescent staining and the use of microwave heating to remove antibodies while retaining fluorescent signals7,8. In comparison to conventional IF, mIF offers several advantages: (1) it can detect weakly expressed antigens that are challenging to identify with conventional IF9,10; (2) it provides high-quality staining with an improved signal-to-noise ratio; (3) it allows for the quantification of tissue-specific structures and regions of interest11; (4) multiplexing multiple pathways efficiently utilizes tissues and conserves limited pathological resources12; (5) multi-parameter analysis through mIF offers deeper insights into tissues, uncovering hidden biological information13.
Overall, mIF allows the observation of different antigen expressions and distributions within the same sample, facilitating the study of target proteins. In the future, researchers seeking to understand the expression and distribution of multiple target proteins will find this technique a valuable choice. This study demonstrates the application of mIF for staining nasal mucosa samples from rats with AR and evaluate the establishment of a rat model of AR.

Yazar Spotlight: Çok Renkli İmmünofloresan ile Alerjik Rinit Araştırmalarını İlerletmek

Allerjik Rinit Sıçanlarının Nazal Mukoza Dokusu Kesitlerinde Çok Renkli İmmünoassay ile İmmünofloresan Etiketleme

Our main research is based on a study of allergic rhinitis. Our research intends to analyze what proteins are associated with allergic rhinitis. Multicolor immunofluorescence is currently used to advance research in our field.In future studies, we will focus on the possible mechanisms of TCM in the treatment of allergic rhinitis.

Watch this Scientific Journal Video about Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis at JoVE.com

Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis  

Allerjik Rinitli Sıçanlardan Nazal Mukozal Örneklerin Alınması ve Ön İşleme Alınması

Başlamak için, bir neşter ile, kas dokusunu ortaya çıkarmak için ötenazi yapılmış bir sıçanın ağzının iki köşesi boyunca hassas bir kesi yapın. Kafatasının her iki tarafındaki elmacık kemiğinin ve mandibula eklemlerini kesmek için bir çift doku makası kullanın. Sonra mandibulayı çıkarın.Burun boşluğu ile maksilla arasındaki kemikli bağlantıyı kesmek için doku makası kullanın. Ardından, burun boşluğunu ortaya çıkarmak için maksillanın derisini ayırmak için bir hemostat kullanın. Burun boşluğu ile infraorbital foramende her iki taraftaki orbital kemikler arasındaki bağlantıyı kesin ve burun boşluğunu çıkarın.Çıkarılan burun boşluğunu fiksasyon için% 4'lük bir Paraformaldehit çözeltisine yerleştirin. Dokuyu kireçten arındırmak için, sabit dokuyu damıtılmış suyla yıkayın. Dokuları, oda sıcaklığındaki dokuların 20 ila 30 katı hacme sahip bir dekalsifikasyon solüsyonuna yerleştirin.Dekalsifikasyon tamamlandıktan sonra, dokuyu bir dehidrasyon kutusuna yerleştirin. Dehidrasyon kutusunu bir kurutucuya aktarın ve farklı inkübasyon sürelerinde artan alkol konsantrasyonlarında dokuyu dehidre edin. Daha sonra, dokuyu iki döngü boyunca 30 dakika boyunca susuz etanol içine yerleştirin.Bunu takiben, dokuyu beş ila 10 dakika boyunca ksilene aktarın ve tekrarlayın, ardından dokuyu bir saat boyunca balmumuna batırın. Balmumu bloğunu gömme kasetlerine yerleştirin. Katılaştıktan sonra balmumu bloklarını çıkarın ve balmumu bloğunu kesin.Kesilmiş balmumu bloğunu bir parafin mikrotomuna yerleştirin ve üç mikrometre kalınlığında dilimler halinde kesin. Kontrol sıçanlarının hematoksilen ve eozin boyaması iyi düzenlenmiş ve kirpikler gösterdi. Nazal septum mukozası, kayda değer nötrofil infiltrasyonu olan hastalık grubunda hasar görmüş ve ayrılmıştı.

Research

JoVE Journal

Medicine

Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis

Immunofluorescent Labeling in Nasal Mucosa Tissue Sections of Allergic Rhinitis Rats via Multicolor Immunoassay

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa, primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE), ...