Name: Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis
Uploaded: 2023-09-22T14:50:00
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multicolor immunostaining of nasal mucosal tissues of rats with allergic rhinitis

アレルギー性鼻炎ラットモデルにおける鼻組織の多色免疫蛍光法

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE)1,2. It is characterized by symptoms such as sneezing, a runny nose, nasal congestion, and nasal itching. With industrialization and urbanization, the prevalence of AR is gradually increasing, affecting approximately 10%-20% of the world&#39;s population1. The immunofluorescence (IF) technique is a fluorescent staining method that utilizes an antibody-antigen binding reaction. It can be employed to detect and quantify the distribution and expression levels of specific proteins in biological tissues or cells. In AR research, IF can simultaneously detect multiple targets, including AR-related cytokines, inflammatory cells, receptors, and more, facilitating the exploration of AR pathogenesis and the effects of drugs3,4,5,6.
The multicolor immunofluorescence (mIF) staining process closely resembles traditional IF, with the addition of an antibody elution step during each round of staining. This modification enables the simultaneous detection of multiple biomarkers on the same tissue section through sequential single-labeling and multiple rounds of re-staining. mIF is based on tyramide signal amplification (TSA), allowing for repeated cycles of TSA fluorescent staining and the use of microwave heating to remove antibodies while retaining fluorescent signals7,8. In comparison to conventional IF, mIF offers several advantages: (1) it can detect weakly expressed antigens that are challenging to identify with conventional IF9,10; (2) it provides high-quality staining with an improved signal-to-noise ratio; (3) it allows for the quantification of tissue-specific structures and regions of interest11; (4) multiplexing multiple pathways efficiently utilizes tissues and conserves limited pathological resources12; (5) multi-parameter analysis through mIF offers deeper insights into tissues, uncovering hidden biological information13.
Overall, mIF allows the observation of different antigen expressions and distributions within the same sample, facilitating the study of target proteins. In the future, researchers seeking to understand the expression and distribution of multiple target proteins will find this technique a valuable choice. This study demonstrates the application of mIF for staining nasal mucosa samples from rats with AR and evaluate the establishment of a rat model of AR.

著者スポットライト:多色免疫蛍光によるアレルギー性鼻炎研究の進歩

多色免疫測定法 による アレルギー性鼻炎ラットの鼻粘膜組織切片における免疫蛍光標識

Our main research is based on a study of allergic rhinitis. Our research intends to analyze what proteins are associated with allergic rhinitis. Multicolor immunofluorescence is currently used to advance research in our field.In future studies, we will focus on the possible mechanisms of TCM in the treatment of allergic rhinitis.

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Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis  

アレルギー性鼻炎ラットの鼻粘膜組織の多色免疫染色

まず、ヘマトキシリンとエオシンで染色したラットの鼻粘膜組織切片を顕微鏡ステージに置きます。画像がはっきりと見えるまで顕微鏡の焦点を調整します。組織画像を40倍でキャプチャします。クエン酸リン酸緩衝液を沸騰するまで加熱します。次に、火から下ろした後、スライドを容器に加えます。沸騰するまで8分間加熱した後、8分間火を止め、その後、中火に切り替えて7分間弱火にします。容器を自然に冷ました後、スライスをPBSに移します。脱色シェーカーを使用して、スライスを5分間振とうします。次に、免疫組織化化学ペンで乾燥組織の周りに円を描きます。インキュベートする前に、スライスに3%過酸化水素溶液を加えます。次に、スライスをPBSに移して、前と同じように洗浄します。ブロックするには、マークされた円内に5%のヤギ血清を塗布します。.インキュベーション後、ブロッキング溶液を慎重に除去し、組織スライスに1〜2ミリリットルのFOXP3を加えます。次に、スライスを湿気のあるチャンバーに入れて一晩インキュベートします。PBSでスライスを洗った後、ろ紙でスライスを軽くたたいて乾かします。次に、1〜2ミリリットルの二次抗体溶液をスライスに加えます。次に、スライスを100マイクロリットルのチラミドシグナル増幅作業溶液中で、室温で暗所で10分間インキュベートします。インキュベーション後、スライスをPBSで3回、それぞれ5分間洗浄します。次に、インキュベーション前に1〜2ミリリットルのDAPI染色溶液をスライスに塗布します。10分間PBS洗浄する前に、スライスをクエンチャーで5分間インキュベートして、自家蛍光を消光します。次に、蛍光消光剤で密封します。20倍および40倍の倍率で染色切片の顕微鏡画像をキャプチャします。対照ラットのヘマトキシリンとエオシン染色では、上皮細胞と繊毛が良好に配列されていることが示されました。鼻中隔粘膜は損傷を受け、好中球浸潤が著しい疾患群で剥離した。多免疫蛍光染色により、疾患群ではRORガンマTおよびTCAM1の発現が増加していることが明らかになりました。しかし、FOXP3は発現不足であった。

Research

JoVE Journal

Medicine

Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis

Immunofluorescent Labeling in Nasal Mucosa Tissue Sections of Allergic Rhinitis Rats via Multicolor Immunoassay

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa, primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE), ...