Name: Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis
Uploaded: 2023-09-22T14:50:00
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multicolor immunostaining of nasal mucosal tissues of rats with allergic rhinitis

Imunofluorescência Multicolorida do Tecido Nasal em Modelo de Rato com Rinite Alérgica

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE)1,2. It is characterized by symptoms such as sneezing, a runny nose, nasal congestion, and nasal itching. With industrialization and urbanization, the prevalence of AR is gradually increasing, affecting approximately 10%-20% of the world&#39;s population1. The immunofluorescence (IF) technique is a fluorescent staining method that utilizes an antibody-antigen binding reaction. It can be employed to detect and quantify the distribution and expression levels of specific proteins in biological tissues or cells. In AR research, IF can simultaneously detect multiple targets, including AR-related cytokines, inflammatory cells, receptors, and more, facilitating the exploration of AR pathogenesis and the effects of drugs3,4,5,6.
The multicolor immunofluorescence (mIF) staining process closely resembles traditional IF, with the addition of an antibody elution step during each round of staining. This modification enables the simultaneous detection of multiple biomarkers on the same tissue section through sequential single-labeling and multiple rounds of re-staining. mIF is based on tyramide signal amplification (TSA), allowing for repeated cycles of TSA fluorescent staining and the use of microwave heating to remove antibodies while retaining fluorescent signals7,8. In comparison to conventional IF, mIF offers several advantages: (1) it can detect weakly expressed antigens that are challenging to identify with conventional IF9,10; (2) it provides high-quality staining with an improved signal-to-noise ratio; (3) it allows for the quantification of tissue-specific structures and regions of interest11; (4) multiplexing multiple pathways efficiently utilizes tissues and conserves limited pathological resources12; (5) multi-parameter analysis through mIF offers deeper insights into tissues, uncovering hidden biological information13.
Overall, mIF allows the observation of different antigen expressions and distributions within the same sample, facilitating the study of target proteins. In the future, researchers seeking to understand the expression and distribution of multiple target proteins will find this technique a valuable choice. This study demonstrates the application of mIF for staining nasal mucosa samples from rats with AR and evaluate the establishment of a rat model of AR.

Autor em destaque: Avançando na pesquisa de rinite alérgica com imunofluorescência multicolorida

Marcação por Imunofluorescência em Cortes de Tecido da Mucosa Nasal de Ratos com Rinite Alérgica via Imunoensaio Multicolorido

Our main research is based on a study of allergic rhinitis. Our research intends to analyze what proteins are associated with allergic rhinitis. Multicolor immunofluorescence is currently used to advance research in our field.In future studies, we will focus on the possible mechanisms of TCM in the treatment of allergic rhinitis.

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Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis  

Imunomarcação Multicolor de Tecidos da Mucosa Nasal de Ratos com Rinite Alérgica

Para começar, coloque as seções de tecido da mucosa nasal de ratos coradas com hematoxilina e eosina em um palco de microscópio. Ajuste o foco do microscópio até que a imagem fique claramente visível. Capture a imagem do tecido em 40X.Aqueça o tampão citrato fosfato até ferver. Em seguida, adicione as lâminas ao recipiente depois de removê-lo do fogo. Depois de aquecer por oito minutos até ferver, desligue o fogo por oito minutos e, em seguida, mude para fogo médio baixo por sete minutos.Depois de deixar o recipiente esfriar naturalmente, transfira as fatias para PBS. Use um agitador descolorante para agitar as fatias por cinco minutos. Em seguida, desenhe um círculo ao redor do tecido seco com uma caneta imunohistoquímica.Adicionar solução de peróxido de hidrogénio a 3% às fatias antes de incubar. Em seguida, transfira as fatias para PBS para lavagem como antes. Para bloquear, aplique soro de cabra a 5% dentro do círculo marcado.Após a incubação, remova cuidadosamente a solução de bloqueio e adicione um a dois mililitros de FOXP3 às fatias de tecido. Em seguida, coloque as fatias em uma câmara úmida para incubação durante a noite. Depois de lavar as fatias em PBS, seque suavemente as fatias com papel de filtro.Em seguida, adicione um a dois mililitros da solução de anticorpos secundários às fatias. Em seguida, incube as fatias em 100 microlitros de solução de trabalho de amplificação de sinal de tiramida por 10 minutos à temperatura ambiente no escuro. Após a incubação, lavar as fatias com PBS três vezes por cinco minutos cada.Agora aplique de um a dois mililitros de solução corante DAPI nas fatias antes da incubação. Apague a autofluorescência incubando as fatias no quencher por cinco minutos antes de uma lavagem PBS de 10 minutos. Em seguida, selá-los com o quencher antifluorescência.Capturar as imagens microscópicas dos cortes corados em aumentos de 20X e 40X. As colorações de hematoxilina e eosina dos ratos controle mostraram células epiteliais e cílios bem arranjados. A mucosa do septo nasal estava lesada e descolada no grupo da doença, com infiltração neutrofílica notável.A coloração por imunofluorescência múltipla revelou que as expressões de ROR Gama T e TCAM1 estavam aumentadas no grupo da doença. No entanto, FOXP3 estava sob expresso.

Research

JoVE Journal

Medicine

Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis

Immunofluorescent Labeling in Nasal Mucosa Tissue Sections of Allergic Rhinitis Rats via Multicolor Immunoassay

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa, primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE), ...