Name: Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis
Uploaded: 2023-09-22T14:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis at JoVE.com

multicolor immunostaining of nasal mucosal tissues of rats with allergic rhinitis

Allerjik rinit sıçan modelinde burun dokusunun çok renkli immünofloresanı

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE)1,2. It is characterized by symptoms such as sneezing, a runny nose, nasal congestion, and nasal itching. With industrialization and urbanization, the prevalence of AR is gradually increasing, affecting approximately 10%-20% of the world&#39;s population1. The immunofluorescence (IF) technique is a fluorescent staining method that utilizes an antibody-antigen binding reaction. It can be employed to detect and quantify the distribution and expression levels of specific proteins in biological tissues or cells. In AR research, IF can simultaneously detect multiple targets, including AR-related cytokines, inflammatory cells, receptors, and more, facilitating the exploration of AR pathogenesis and the effects of drugs3,4,5,6.
The multicolor immunofluorescence (mIF) staining process closely resembles traditional IF, with the addition of an antibody elution step during each round of staining. This modification enables the simultaneous detection of multiple biomarkers on the same tissue section through sequential single-labeling and multiple rounds of re-staining. mIF is based on tyramide signal amplification (TSA), allowing for repeated cycles of TSA fluorescent staining and the use of microwave heating to remove antibodies while retaining fluorescent signals7,8. In comparison to conventional IF, mIF offers several advantages: (1) it can detect weakly expressed antigens that are challenging to identify with conventional IF9,10; (2) it provides high-quality staining with an improved signal-to-noise ratio; (3) it allows for the quantification of tissue-specific structures and regions of interest11; (4) multiplexing multiple pathways efficiently utilizes tissues and conserves limited pathological resources12; (5) multi-parameter analysis through mIF offers deeper insights into tissues, uncovering hidden biological information13.
Overall, mIF allows the observation of different antigen expressions and distributions within the same sample, facilitating the study of target proteins. In the future, researchers seeking to understand the expression and distribution of multiple target proteins will find this technique a valuable choice. This study demonstrates the application of mIF for staining nasal mucosa samples from rats with AR and evaluate the establishment of a rat model of AR.

Yazar Spotlight: Çok Renkli İmmünofloresan ile Alerjik Rinit Araştırmalarını İlerletmek

Allerjik Rinit Sıçanlarının Nazal Mukoza Dokusu Kesitlerinde Çok Renkli İmmünoassay ile İmmünofloresan Etiketleme

Our main research is based on a study of allergic rhinitis. Our research intends to analyze what proteins are associated with allergic rhinitis. Multicolor immunofluorescence is currently used to advance research in our field.In future studies, we will focus on the possible mechanisms of TCM in the treatment of allergic rhinitis.

Watch this Scientific Journal Video about Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis at JoVE.com

Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis  

Allerjik Rinitli Sıçanların Nazal Mukozal Dokularının Çok Renkli İmmün Boyanması

Başlamak için, hematoksilen ve eozin lekeli sıçan burun mukozal dokusu bölümlerini mikroskop aşamasına yerleştirin. Görüntü net bir şekilde görünene kadar mikroskobun odağını ayarlayın. Doku görüntüsünü 40X'te yakalayın.Sitrat fosfat tamponunu kaynayana kadar ısıtın. Ardından slaytları ocaktan aldıktan sonra kaba ekleyin. Kaynayana kadar sekiz dakika ısıttıktan sonra, ısıyı sekiz dakika kapatın ve ardından yedi dakika orta kısık ateşe geçin.Kabın doğal olarak soğumasına izin verdikten sonra dilimleri PBS'ye aktarın. Dilimleri beş dakika sallamak için renk giderici bir çalkalayıcı kullanın. Daha sonra immünohistokimyasal bir kalemle kurutulmuş dokunun etrafına bir daire çizin.İnkübe etmeden önce dilimlere% 3 hidrojen peroksit çözeltisi ekleyin. Ardından dilimleri daha önce olduğu gibi yıkamak için PBS'ye aktarın. Engellemek için, işaretli daire için% 5 keçi serumu uygulayın.İnkübasyondan sonra, bloke edici çözeltiyi dikkatlice çıkarın ve doku dilimlerine bir ila iki mililitre FOXP3 ekleyin. Daha sonra dilimleri gece boyunca inkübasyon için nemli bir odaya yerleştirin. Dilimleri PBS'de yıkadıktan sonra, dilimleri filtre kağıdı ile nazikçe kurulayın.Daha sonra dilimlere bir ila iki mililitre ikincil antikor çözeltisi ekleyin. Daha sonra dilimleri karanlıkta oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 100 mikrolitre tiramid sinyal amplifikasyon çalışma solüsyonunda inkübe edin. İnkübasyondan sonra, dilimleri PBS ile her biri beş dakika boyunca üç kez yıkayın.Şimdi inkübasyondan önce dilimlere bir ila iki mililitre DAPI boyama solüsyonu uygulayın. 10 dakikalık bir PBS yıkamasından önce dilimleri söndürücüde beş dakika inkübe ederek otomatik floresansı söndürün. Ardından bunları anti floresan söndürücü ile kapatın.20X ve 40X büyütme altında lekeli bölümlerin mikroskobik görüntülerini yakalayın. Kontrol sıçanlarının hematoksilen ve eozin boyaması iyi düzenlenmiş epitel hücreleri ve kirpikler gösterdi. Nazal septum mukozası, kayda değer nötrofil infiltrasyonu olan hastalık grubunda hasar görmüş ve ayrılmıştı.Çoklu immünofloresan boyama, hastalık grubunda ROR Gamma T ve TCAM1 ekspresyonlarının arttığını ortaya koydu. Ancak, FOXP3 yeterince ifade edilmedi.

Research

JoVE Journal

Medicine

Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis

Immunofluorescent Labeling in Nasal Mucosa Tissue Sections of Allergic Rhinitis Rats via Multicolor Immunoassay

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa, primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE), ...