För att utföra små extracellulära vesiklar eller SEV-injektioner i mus, använd SEV isolerade från humana placenta-explantat, odlade under hypoxiska och normoxiska förhållanden. Späd 200 mikrogram SEV med placenta i fosfatbuffert vid pH 7,4, upp till en slutlig volym på 70 mikroliter. Före injektionen, utvärdera djurets välbefinnande med hjälp av RMCBS-skalan.
Använd sedan en insulinspruta med en 30-gauge nål och injicera lösningen i den yttre halsvenen på den korrekt sövda musen. Efter injektionen, tryck lätt på det injicerade området i 15 sekunder med en torr bomullspinne. Utvärdera musens välbefinnande med hjälp av RMCBS-skalan tre, sex, 12 och 24 timmar efter injektionen.
För analys av Evans blå extravasering, bered 2% Evans blå färglösning i PBS. 24 timmar efter injektion av SEV med retroorbital access, injicera Evans blå lösning i den korrekt sövda musen. När Evans blue har cirkulerat i djurkroppen, utför intrakardiell perfusion på den sövda musen med cirka tre milliliter saltlösning för att ta bort färgämnet från cirkulationen.
Efter att ha fixerat musen med en intrakardiell infusion av 4% paraformaldehyd i BBS och försiktigt extraherat hjärnan, väg och fotografera den. Efter det demonstrerade förfarandet extraheras hjärnorna från djuren i varje grupp. Använd ett stereozoommikroskop för att visualisera de tagna bilderna av de dissekerade hjärnskivorna.
Använd de tagna bilderna för att kvantifiera Evans blå extravasering med hjälp av programvaran ImageJ. Till skillnad från möss som injicerats med SEV från normoxiska placenta, visade möss som injicerats med SEV från hypoxiska placenta en progressiv minskning av den neurologiska poängen fram till 24 timmar efter injektionen. Hjärnor från möss som injicerats med SEV från hypoxiska placenta hade högre Evans blue-extravasering än hjärnor från djur som injicerats med SEV från normoxiska placenta.
Hjärnor hos möss som injicerats med SEV från hypoxiska moderkakor visade minskade mängder CLDN5-protein, vilket är avgörande för tätheten i blod-hjärnbarriären. Alla dessa resultat tydde på en störning av blod-hjärnbarriären som induceras av SEV från hypoxiska placentor.