للبدء ، استخدم حاضنة ومصباح LED Microplate لإنشاء صندوق إضاءة للتحكم في التعرض للضوء ودرجة الحرارة. بعد ذلك ، ضع صفيحة ستة آبار على الرف العلوي للحاضنة ، وتحقق مما إذا كان شعاع الضوء يشملها بالتساوي. استخدم ورقة لتصور توزيع تغطية الضوء.
استخدم مقياس الضوء لقياس الإشعاع والتوحيد المكاني. قبل يوم واحد على الأقل من الحقن ، اصنع أطباق الحقن وستة ألواح بئر مغطاة بالأغاروز. اشطف قالب طبق الحقن بوسط الجنين ، وضعه برفق على الذوبان والأغاروز.
بمجرد أن يصلب الأغاروز ، استخدم اللسان بدقة لإزالة القالب. بعد ذلك ، قم بإعداد ماصات زجاجية ملتهبة لتجارب التألق المناعي على الأجنة منزوعة الكلور. ضع نهاية ماصة زجاجية في كعكة ولهب الموقد ، وقم بتدويرها باستمرار حتى تصبح الحواف ناعمة.
قم بإعداد مزيج الحقن باستخدام mRNAs الموضحة هنا. بالنسبة لفحص التنميط الظاهري ، أدخل الإبرة من خلال الكوريون مباشرة في وسط الخلية في مرحلة الخلية الواحدة ، وحقن نانولتر واحد من مزيج الحقن. في حالة إجراء مقايسة التألق المناعي ، استهدف مركز خلية الأجنة المغلفة في مرحلة الخلية الواحدة.
بالنسبة لكلا المقايستين ، قم بإعداد ما يكفي من الأجنة للأجنة غير المعرضة للحقن ، والحقن غير المكشوف ، والمكشوف غير المحقون ، والأجنة المحقونة المكشوفة. حدد ما لا يقل عن 30 جنينا لكل حالة. لمقايسة التألق المناعي ، قم بإعداد طبق إضافي يحتوي على أجنة غير محقونة كوكيل لتقييم تطور مراحل النمو.
بعد الحقن ، احتضان الأجنة في أطباق بتري عند 28 درجة مئوية.
