Pour commencer, utilisez un incubateur et un illuminateur de microplaques LED pour créer une boîte à lumière pour contrôler l’exposition à la lumière et la température. Ensuite, placez une plaque à six puits sur l’étagère supérieure de l’incubateur et vérifiez si le faisceau lumineux l’entoure uniformément. Utilisez une feuille de papier pour visualiser la répartition de la couverture lumineuse.
Utilisez un posemètre pour mesurer l’irradiance et l’uniformité spatiale. Au moins un jour avant les injections, préparez des boîtes d’injection et des plaques à six puits recouvertes d’agarose. Rincez un moule à plat d’injection avec du milieu embryonnaire et placez-le doucement sur la mue et l’agarose.
Une fois l’agarose solidifiée, utilisez délicatement la languette pour retirer le moule. Ensuite, préparez des pipettes en verre flammé pour des expériences d’immunofluorescence sur des embryons déchlorés. Placez l’extrémité d’une pipette en verre dans un petit pain et la flamme du brûleur, et tournez continuellement jusqu’à ce que les bords deviennent lisses.
Préparez un mélange d’injection à l’aide des ARNm illustrés ici. Pour le test de phénotypage, introduisez l’aiguille à travers le corion directement au centre de la cellule au stade d’une cellule et injectez un nanolitre du mélange d’injection. Si vous effectuez un test d’immunofluorescence, ciblez le centre de la cellule des embryons enrobés au stade d’une cellule.
Pour les deux essais, préparez suffisamment d’embryons pour les embryons non exposés non injectés, les embryons injectés non exposés, les embryons exposés non injectés et les embryons injectés exposés. Sélectionnez au moins 30 embryons par condition. Pour le test d’immunofluorescence, préparez une boîte supplémentaire contenant des embryons non injectés comme substitut pour évaluer la progression des stades de développement.
Après l’injection, incuber les embryons dans des boîtes de Pétri à 28 degrés Celsius.
