शुरू करने के लिए, प्रकाश जोखिम और तापमान को नियंत्रित करने के लिए एक प्रकाश बॉक्स बनाने के लिए एक इनक्यूबेटर और एक एलईडी माइक्रोप्लेट प्रकाशक का उपयोग करें। फिर, इनक्यूबेटर के ऊपरी शेल्फ पर एक छह अच्छी तरह से थाली स्थिति, और प्रकाश किरण समान रूप से इसे शामिल किया कि क्या जांचें. प्रकाश कवरेज के वितरण की कल्पना करने के लिए कागज की एक शीट का उपयोग करें।
विकिरण और स्थानिक एकरूपता को मापने के लिए एक प्रकाश मीटर का प्रयोग करें। इंजेक्शन से कम से कम एक दिन पहले, इंजेक्शन व्यंजन और एग्रोज़-लेपित छह अच्छी प्लेटें बनाएं। भ्रूण माध्यम के साथ एक इंजेक्शन डिश मोल्ड कुल्ला, और धीरे से पिघला हुआ और agarose पर जगह है.
एक बार जब अगारोज़ जम जाता है, तो मोल्ड को हटाने के लिए टैब का नाजुक उपयोग करें। अगला, dechlorinated भ्रूण पर immunofluorescence प्रयोगों के लिए flamed ग्लास पिपेट तैयार. एक ग्लास विंदुक के अंत को एक बन और बर्नर लौ में रखें, और किनारों को चिकना होने तक लगातार घुमाएं।
यहाँ दिखाया mRNAs का उपयोग एक इंजेक्शन मिश्रण तैयार करें. फेनोटाइपिंग परख के लिए, एक सेल चरण में सेल के केंद्र में सीधे कोरियन के माध्यम से सुई का परिचय दें, और इंजेक्शन मिश्रण के एक नैनोलीटर इंजेक्षन करें। यदि एक इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख का संचालन करते हैं, तो एक कोशिका चरण में लेपित भ्रूण के सेल के केंद्र को लक्षित करें।
दोनों assays के लिए, unexposed गैर इंजेक्शन, unexposed इंजेक्शन, उजागर गैर इंजेक्शन, और उजागर इंजेक्शन भ्रूण के लिए पर्याप्त भ्रूण तैयार. हालत प्रति कम से कम 30 भ्रूण का चयन करें. immunofluorescence परख के लिए, विकास के चरणों की प्रगति का आकलन करने के लिए एक प्रॉक्सी के रूप में गैर इंजेक्शन भ्रूण युक्त एक अतिरिक्त पकवान तैयार.
इंजेक्शन के बाद, 28 डिग्री सेल्सियस पर पेट्री व्यंजन में भ्रूण सेते हैं.
