للبدء ، احتضان أجنة الزرد المحقونة عند 28 درجة مئوية. حوالي 1.5 HPF في مرحلة الخلايا من أربعة إلى 16 ، قم بإزالة الأجنة غير المخصبة وغير الصحية. بالنسبة لمقايسة التنميط الظاهري ، لف لوحة التحكم غير المكشوفة بأجنة غير محقونة ومحقونة بورق الألمنيوم.
ضع اللوحة المغطاة بالرقائق على الرف السفلي ، واللوحة المكشوفة على الرف العلوي لصندوق الإضاءة 28 درجة مئوية. بعد التأكد من أن غطاء الطبق في مكانه ، قم بتنشيط الضوء الأزرق ، وأغلق باب صندوق الضوء لمنع التعرض غير المقصود لضوء الغرفة. بالنسبة لمقايسة التألق المناعي حوالي 1.5 HPF ، قم بلف الأطباق المكشوفة وغير المكشوفة بشكل فردي بورق الألمنيوم مع إبقاء الطبق الوكيل غير مغلف.
ضع جميع الأطباق في صندوق الإضاءة 28 درجة مئوية دون تنشيط LED. أغلق باب صندوق الضوء لمنع التعرض غير المقصود لضوء الغرفة. في حوالي خمسة HPF ، استخدم منظار تشريح لتقييم المرحلة التنموية للأجنة البديلة.
قم أيضا بإزالة الأطباق المغلفة لضمان التعرض لدرجة حرارة موحدة في جميع الأطباق. بمجرد أن تصل الأجنة الوكيلة إلى 40٪ ، اكشف الطبق المكشوف وضعه على الرف العلوي لصندوق الضوء. احتفظ بالطبق غير المكشوف مغطى على الرف السفلي.
قم بتنشيط الضوء الأزرق على الفور ، وأغلق الباب ، واضبط مؤقتا لمدة 20 دقيقة. للتحضير للتثبيت ، تخلص من أكبر قدر ممكن من ضوء الغرفة. قبل التثبيت مباشرة ، خذ أنابيب تحتوي على 4٪ فورمالديهايد من أربع درجات مئوية وضعها بجانب صندوق الضوء.
بعد 20 دقيقة ، افتح باب صندوق الضوء وأزل الطبق الذي لم يتعرض للضوء. استخدم طرف ماصة زجاجي ملتهب لإزالة الأجنة الحساسة للضوء من الطبق. ثم لغمر الأجنة في 4٪ فورمالديهايد ، اغمر طرف الماصة الزجاجي الملتهب في الفورمالديهايد ، واسمح للأجنة بالغرق في السائل.
قم بتخزين الأجنة الثابتة عند أربع درجات مئوية طوال الليل.
