शुरू करने के लिए, इंजेक्शन zebrafish भ्रूण 28 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं. चार से 16 सेल चरण में लगभग 1.5 एचपीएफ, अनिषेचित और अस्वास्थ्यकर भ्रूण को हटा दें। फेनोटाइपिंग परख के लिए, एल्यूमीनियम पन्नी में गैर-इंजेक्शन और इंजेक्शन भ्रूण के साथ अनपेक्षित नियंत्रण प्लेट लपेटें।
पन्नी से ढकी प्लेट को निचले शेल्फ पर रखें, और उजागर प्लेट को 28 डिग्री सेल्सियस प्रकाश बॉक्स के ऊपरी शेल्फ पर रखें। यह पुष्टि करने के बाद कि डिश कवर जगह पर है, नीली रोशनी को सक्रिय करें, और अनपेक्षित कमरे के प्रकाश जोखिम को रोकने के लिए लाइट बॉक्स का दरवाजा बंद कर दें। 1.5 एचपीएफ के आसपास इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख के लिए, प्रॉक्सी डिश को बिना लपेटे रखते हुए व्यक्तिगत रूप से उजागर और अनएक्सपोज्ड व्यंजनों को एल्यूमीनियम पन्नी में लपेटें।
एलईडी को सक्रिय किए बिना सभी व्यंजनों को 28 डिग्री सेल्सियस प्रकाश बॉक्स में रखें। कमरे की रोशनी के अनजाने में संपर्क को रोकने के लिए लाइट बॉक्स का दरवाजा बंद कर दें। लगभग पांच एचपीएफ में, प्रॉक्सी भ्रूण के विकास के चरण का मूल्यांकन करने के लिए एक विदारक गुंजाइश का उपयोग करें।
सभी व्यंजनों में एक समान तापमान जोखिम सुनिश्चित करने के लिए लिपटे व्यंजनों को भी हटा दें। प्रॉक्सी भ्रूण 40% epiboly तक पहुँचने के बाद, उजागर पकवान को उजागर और प्रकाश बॉक्स के ऊपरी शेल्फ पर जगह है. अनएक्सपोज़्ड डिश को निचले शेल्फ पर ढक कर रखें।
नीली बत्ती को तुरंत सक्रिय करें, दरवाजा बंद करें और 20 मिनट के लिए टाइमर सेट करें। निर्धारण के लिए तैयार करने के लिए, जितना संभव हो उतना कमरे की रोशनी को खत्म करें। निर्धारण से ठीक पहले, चार डिग्री सेल्सियस से 4% फॉर्मलाडेहाइड युक्त ट्यूब लें और उन्हें प्रकाश बॉक्स के बगल में रखें।
20 मिनट के बाद, लाइट बॉक्स का दरवाजा खोलें और उस डिश को हटा दें जो प्रकाश के संपर्क में नहीं थी। पकवान से प्रकाश संवेदनशील भ्रूण को हटाने के लिए एक flamed गिलास विंदुक टिप का प्रयोग करें. फिर भ्रूण को 4% फॉर्मलाडेहाइड में विसर्जित करने के लिए, फॉर्मलाडेहाइड में फ्लेम्ड ग्लास पिपेट टिप को डुबोएं, और भ्रूण को तरल में डूबने दें।
रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर तय भ्रूण की दुकान.