Preparation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

התחל על ידי הצבת העכבר במצב שכיבה ותיקון הגפיים עם מחטים. יש למרוח 75% אתנול על הגוף הקדמי של החיה. לעשות חתך אורכי דרך העור ואת fascia על הבטן ואת בית החזה.

חותכים את הצלעות parasternal ולקפל את בית החזה כדי לקבל גישה חופשית ללב. תקן את בית החזה מקופל כלפי מעלה עם מחטים. פתח את האטריום הימני באמצעות מספריים.

באמצעות צינורית, להחיל 20 מיליליטר של PBS חד פעמי לתוך החדר השמאלי כדי לשטוף את הדם דרך אטריום ימין חתוך. בצע חתך אורכי על ידי חיתוך העור על גבי ראש העכבר כדי לחשוף את הגולגולת ולהזיז את העור סביב הראש באמצעות מלקחיים. חותכים את הגולגולת בעזרת מספריים לאורך התפר הסגיטלי.

הכנס את קצה המספריים לאורך קו החתך כדי לפתוח את הקלוטה. הסר את החלקים הנותרים של הקלוטה עם מלקחיים, כך המוח חשוף לחלוטין. הסר את המוח בזהירות ומקם אותו לתוך מטריצה במוח murine.

חתכו את המוח לפרוסות קשת בעובי מילימטר אחד באמצעות סכין גילוח. בעזרת מספריים, לחתוך את עמוד השדרה ממש מעל הפסגה iliac. הכנס מחט 20 מד המחוברת למזרק 20 מיליליטר המכיל PBS חד פעמי לתעלת עמוד השדרה.

לשטוף את חוט השדרה מתוך תעלת עמוד השדרה מ caudal לגולגולת. חתכו את חוט השדרה למקטעים באורך 0.5 ס"מ באמצעות אזמל. אחסן את תרחיף תאי CNS המורכב מהמוח ומחוט השדרה המתאים בצלחת פטרי המכילה שלושה מיליליטר של DPBS קר.