Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

للبدء ، تشريح أنسجة الدماغ والحبل الشوكي وتخزين تعليق الخلية على الجليد. ثم تحضير حجم مناسب من مزيج الإنزيم -1 و 2. انقل 1،950 ميكرولتر من مزيج الإنزيم -1 إلى الأنبوب C ، وأضف قطع الأنسجة من معلق خلية الجهاز العصبي المركزي.

ثم أضف 30 ميكرولترا من مزيج الإنزيم -2 إلى الأنبوب C. أغلق الأنابيب C بإحكام وقم بتوصيلها رأسا على عقب على غلاف جهاز فصل الخلية باستخدام السخانات. قم بتشغيل البرنامج المناسب والمراقبة لمدة خمس دقائق على الأقل للتأكد من أن جميع الأنابيب تدور بنفس السرعة.

في غضون ذلك ، ضع مصفاة 70 ميكرون على أنبوب سعة 50 ملليلتر وقم بترطيب المصفاة مسبقا بملليلتر من DPBS. بعد إنهاء البرنامج ، افصل الأنابيب C عن جهاز الانفصال وأجهزة الطرد المركزي العينات عند 300 جم لمدة دقيقة واحدة عند أربع درجات مئوية. أعد تعليق العينة وضعها على المصفاة المبللة مسبقا.

أضف 10 ملليلتر من DPBS البارد إلى أنبوب C الفارغ. امزج وأضف التعليق على المصفاة المقابلة. بعد التخلص من المصافي ، قم بطرد مركزي تعليق الخلية مرة أخرى لمدة 10 دقائق ، ثم استنشاق المادة الطافية بعناية للحصول على حبيبات خلوية.