Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

כדי להתחיל, לנתח את המוח ואת רקמת חוט השדרה ולאחסן את תרחיף התא על קרח. לאחר מכן הכינו נפח מתאים של אנזימים מעורבבים-1 ו-2. העבר 1, 950 מיקרוליטר של אנזים mix-1 לתוך צינור C, ולהוסיף את חתיכות הרקמה של השעיית תא CNS.

לאחר מכן הוסף 30 מיקרוליטר של אנזים mix-2 לצינור C. סגור את צינורות C בחוזקה וחבר אותם הפוך על השרוול של מפיץ התא עם תנורי חימום. הפעל את התוכנית המתאימה והתבונן במשך חמש דקות לפחות כדי להבטיח שכל הצינורות מסתובבים באותה מהירות.

בינתיים, הניחו מסננת של 70 מיקרון על צינור של 50 מיליליטר והרטיבו מראש את המסננת בשני מיליליטר DPBS. לאחר סיום התוכנית, נתקו את צינורות C מהדיסוציאטור וצנטריפוגו את הדגימות ב -300 גרם למשך דקה אחת בארבע מעלות צלזיוס. השהה מחדש את הדגימה והחל אותה על המסננת הלחה מראש.

הוסף 10 מיליליטר של DPBS קר לצינור C הריק. מערבבים ומוסיפים את המתלה למסננת המתאימה. לאחר השלכת המסננת, צנטריפוגו שוב את מתלה התא למשך 10 דקות, ולאחר מכן שאפו בזהירות את הסופרנאטנט להשיג גלולת תא.