Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

शुरू करने के लिए, मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी के ऊतकों को काटना और बर्फ पर सेल निलंबन की दुकान। फिर एंजाइम मिश्रण-1 और 2 की एक उपयुक्त मात्रा तैयार करें। सी ट्यूब में एंजाइम मिश्रण -1 के 1, 950 माइक्रोलीटर स्थानांतरण, और सीएनएस सेल निलंबन के ऊतक टुकड़े जोड़ें।

फिर सी-ट्यूब में एंजाइम मिक्स -2 के 30 माइक्रोलीटर जोड़ें। सी-ट्यूबों को कसकर बंद करें और उन्हें हीटर के साथ सेल डिसोसिएटर की आस्तीन पर उल्टा संलग्न करें। उपयुक्त कार्यक्रम चलाएं और यह सुनिश्चित करने के लिए कम से कम पांच मिनट तक निरीक्षण करें कि सभी ट्यूब एक ही वेग से मुड़ें।

इस बीच, 70-मिलीलीटर ट्यूब पर 50-माइक्रोन स्ट्रेनर रखें और दो मिलीलीटर डीपीबीएस के साथ छलनी को पूर्व-गीला करें। कार्यक्रम की समाप्ति के बाद, विघटनकर्ता से सी ट्यूबों को अलग करें और नमूनों को चार डिग्री सेल्सियस पर एक मिनट के लिए 300 ग्राम पर अपकेंद्रित्र करें। नमूने को फिर से निलंबित करें और इसे पूर्व-सिक्त छलनी पर लागू करें।

खाली सी-ट्यूब में 10 मिलीलीटर ठंडे डीपीबीएस जोड़ें। मिक्स करें और संबंधित छलनी पर निलंबन जोड़ें। छलनी त्यागने के बाद, 10 मिनट के लिए फिर से सेल निलंबन अपकेंद्रित्र, और फिर ध्यान से एक सेल गोली प्राप्त करने के लिए सतह पर तैरनेवाला महाप्राण है.