للبدء ، احصل على حبيبات خلوية بعد تفكك أنسجة الجهاز العصبي المركزي وأعد تعليقها ب 3،100 ميكرولتر من DPBS في أنبوب واحد سعة 15 ملليلتر. لا دوامة. أضف 1،800 ميكرولتر من محلول إزالة الحطام من مجموعة تفكك الدماغ البالغة إلى تعليقين لخلايا الجهاز العصبي المركزي المجمعة.
اقلب الأنبوب وامزج التعليق ، ثم قم بتراكبه برفق مع 4 ملليلتر من DPBS البارد ولاحظ تدرجا واضحا. أجهزة الطرد المركزي الأنابيب لمدة 10 دقائق عند 3،000 جرام عند 4 درجات مئوية مع تسارع كامل وعدم وجود انقطاع. بعد الطرد المركزي ، يتم تشكيل ثلاث مراحل.
قم بشفط المرحلتين العلويتين تماما وتخلص منهما ، مع ضمان عدم ترك بقايا المايلين وراءها. املأ الأنبوب ب DPBS بارد يصل إلى 14 ملليلتر وأغلقه. اقلب الأنبوب بقوة على طاولة العمل حتى تنفصل حبيبات الخلية عن قاع الأنبوب.
أجهزة الطرد المركزي العينة ونضح الطافي تماما. لإزالة خلايا الدم الحمراء ، أضف 1 ملليلتر من محلول إزالة خلايا الدم الحمراء إلى حبيبات الخلية. بعد إعادة تعليق الحبيبات ، احتضان المحلول لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية.
ثم أضف 10 ملليلتر من المخزن المؤقت PB البارد ، وطرد العينة ، واستنشق المادة الطافية تماما. لعد الخلايا ، قم بتخفيف تعليق الخلية بمقدار 50 مرة في المخزن المؤقت PB ثم بمقدار 1 إلى 10 تخفيف في محلول Trypan Blue بنسبة 0.4٪. ثم حدد عدد الخلايا ، باستخدام غرفة عد محسنة.