Verkrijg om te beginnen een celpellet na dissociatie van CZS-weefsel en suspendeer deze opnieuw met 3.100 microliter DPBS in een buis van 15 milliliter. Draai niet vortex. Voeg 1.800 microliter van de puinverwijderingsoplossing uit de dissociatiekit voor volwassen hersenen toe aan twee gepoolde CZS-celsuspensies.
Keer de buis om en meng de suspensie, bedek deze dan voorzichtig met 4 milliliter koude DPBS en observeer een duidelijke gradiënt. Centrifugeer de buisjes gedurende 10 minuten op 3.000 g bij 4 graden Celsius met volledige acceleratie en zonder pauze. Na het centrifugeren worden drie fasen gevormd.
Zuig de twee bovenste fasen volledig op en gooi ze weg, zodat er geen myelineresten achterblijven. Vul de buis met koude DPBS tot 14 milliliter en sluit deze. Keer de buis met kracht om op de werkbank totdat de celpellet loskomt van de bodem van de buis.
Centrifugeer het monster en zuig het supernatans volledig op. Voeg voor het verwijderen van rode bloedcellen 1 milliliter van de oplossing voor het verwijderen van rode bloedcellen toe aan de celkorrel. Na het opnieuw suspenderen van de pellet, incubeer de oplossing gedurende 10 minuten bij 4 graden Celsius.
Voeg vervolgens 10 milliliter koude PB-buffer toe, centrifugeer het monster en zuig het supernatant volledig op. Voor het tellen van cellen verdunt u de celsuspensie met 50 maal in PB-buffer en vervolgens met 1 tot 10 verdunning in 0,4%Trypan Blue-oplossing. Bepaal vervolgens het celgetal met behulp van een verbeterde telkamer.
