शुरू करने के लिए, सीएनएस ऊतक के पृथक्करण के बाद एक सेल गोली प्राप्त करें और इसे एक 15-मिलीलीटर ट्यूब में डीपीबीएस के 3, 100 माइक्रोलीटर के साथ फिर से निलंबित करें। भंवर मत करो। वयस्क मस्तिष्क पृथक्करण किट से मलबे हटाने के समाधान के 1, 800 माइक्रोलीटर को दो पूल किए गए सीएनएस सेल निलंबन में जोड़ें।
ट्यूब को उल्टा करें और निलंबन को मिलाएं, फिर धीरे से इसे 4 मिलीलीटर ठंडे डीपीबीएस के साथ ओवरले करें और एक स्पष्ट ढाल का निरीक्षण करें। पूर्ण त्वरण और कोई ब्रेक के साथ 4 डिग्री सेल्सियस पर 3, 000 ग्राम पर 10 मिनट के लिए ट्यूबों को अपकेंद्रित्र करें। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, तीन चरण बनते हैं।
दो शीर्ष चरणों को पूरी तरह से महाप्राण करें और उन्हें त्याग दें, यह सुनिश्चित करते हुए कि कोई माइलिन अवशेष पीछे नहीं छोड़ा गया है। ट्यूब को 14 मिलीलीटर तक ठंडे डीपीबीएस से भरें और इसे बंद कर दें। कार्यक्षेत्र पर बल के साथ ट्यूब पलटना जब तक सेल गोली ट्यूब के नीचे से अलग हो जाता है.
नमूना अपकेंद्रित्र और सतह पर तैरनेवाला पूरी तरह से महाप्राण. लाल रक्त कोशिका को हटाने के लिए, सेल गोली में लाल रक्त कोशिका हटाने के समाधान के 1 मिलीलीटर जोड़ें। गोली को फिर से निलंबित करने के बाद, 4 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए समाधान सेते हैं।
फिर ठंडे पीबी बफर के 10 मिलीलीटर जोड़ें, नमूना अपकेंद्रित्र, और पूरी तरह से सतह पर तैरनेवाला महाप्राण। सेल गिनती के लिए, पीबी बफर में 50 बार सेल निलंबन को पतला करें और फिर 0.4% ट्राइपैन ब्लू समाधान में 1 से 10 कमजोर पड़ने से। फिर एक बेहतर गिनती कक्ष का उपयोग करके, सेल गिनती निर्धारित करें।