Till att börja med, skaffa en cellpellet efter dissociation av CNS-vävnad och återsuspendera den med 3 100 mikroliter DPBS i ett 15-milliliters rör. Virvla inte. Tillsätt 1 800 mikroliter av skräpborttagningslösningen från dissociationssatsen för vuxna hjärnor till två poolade CNS-cellsuspensioner.
Vänd upp och ner på röret och blanda suspensionen, lägg sedan försiktigt över den med 4 milliliter kall DPBS och observera en tydlig lutning. Centrifugera rören i 10 minuter vid 3 000 g vid 4 grader Celsius med full acceleration och utan paus. Efter centrifugering bildas tre faser.
Aspirera de två översta faserna helt och kassera dem, se till att inga myelinrester lämnas kvar. Fyll röret med kall DPBS upp till 14 ml och stäng det. Vänd röret med kraft på arbetsbänken tills cellpelleten lossnar från botten av röret.
Centrifugera provet och aspirera supernatanten fullständigt. För avlägsnande av röda blodkroppar, tillsätt 1 milliliter av lösningen för avlägsnande av röda blodkroppar till cellpelleten. Efter återsuspenderande av pelleten, inkubera lösningen i 10 minuter vid 4 grader Celsius.
Tillsätt sedan 10 milliliter kall PB-buffert, centrifugera provet och aspirera supernatanten helt. För cellräkning, späd cellsuspensionen med 50 gånger i PB-buffert och sedan med 1 till 10 utspädning i 0,4 % Trypan Blue-lösning. Bestäm sedan cellantalet med hjälp av en förbättrad räknekammare.