Başlamak için, CNS dokusunun ayrışmasından sonra bir hücre peleti elde edin ve 15 mililitrelik bir tüpte 3.100 mikrolitre DPBS ile yeniden süspanse edin. Girdap yapmayın. Yetişkin beyin ayrışma kitinden 1.800 mikrolitre enkaz temizleme solüsyonunu iki havuzlanmış CNS hücre süspansiyonuna ekleyin.
Tüpü ters çevirin ve süspansiyonu karıştırın, ardından 4 mililitre soğuk DPBS ile hafifçe kaplayın ve net bir gradyan gözlemleyin. Tüpleri 4 santigrat derecede 3.000 g'da 10 dakika boyunca tam hızlanma ve ara vermeden santrifüjleyin. Santrifüjlemeden sonra üç faz oluşur.
En üstteki iki fazı tamamen aspire edin ve geride miyelin kalıntısı kalmadığından emin olarak bunları atın. Tüpü 14 mililitreye kadar soğuk DPBS ile doldurun ve kapatın. Hücre peleti tüpün altından ayrılana kadar tüpü tezgah üzerinde kuvvetle ters çevirin.
Numuneyi santrifüjleyin ve süpernatanı tamamen aspire edin. Kırmızı kan hücresi çıkarılması için, hücre peletine 1 mililitre kırmızı kan hücresi çıkarma solüsyonu ekleyin. Peleti tekrar süspanse ettikten sonra, çözeltiyi 4 santigrat derecede 10 dakika inkübe edin.
Ardından 10 mililitre soğuk PB tamponu ekleyin, numuneyi santrifüjleyin ve süpernatanı tamamen aspire edin. Hücre sayımı için, hücre süspansiyonunu PB tamponunda 50 kez seyreltin ve ardından% 0.4 Tripan Mavisi çözeltisinde 1 ila 10 seyreltme ile seyreltin. Ardından, geliştirilmiş bir sayma odası kullanarak hücre sayısını belirleyin.
