Isolation of CNS Cell Types Using Magnetic Beads in Naive and EAE Mice

Til at begynde med opdeles den rensede, ufortyndede mus CNS-cellesuspension i to fraktioner for yderligere isolering af mikroglia og oligodendrocytter. Derefter tilsættes magnetisk mærket mikroperle, der er specifik for overfladeantigenet for forskellige CNS-celletyper, til den respektive cellesuspension. Placer kolonnen i magnetfeltet, sidestille kolonnen, og tilsæt derefter den resulterende cellesuspension på kolonnen.

Magnetisk mærkede celler bevares i kolonnen, og umærkede celler løber igennem. Når du har fjernet søjlen fra magnetfeltet, skylles magnetisk mærkede celler ud af kolonnen i et rør som den positivt valgte cellefraktion. Opdel den negative strøm fra oligodendrocytterne i to fraktioner for yderligere isolering af neuroner og astrocytter.

Flowcytometrianalyse ved hjælp af celletypespecifikke markører kombineret med levende eller døde cellediskrimination gav mikroglia, oligodendrocytter, astrocytter og neuroner. Fænotypisk karakterisering af de forskellige cellepopulationer viste, at enkeltcellesuspensioner med ca. 90% renhed og levedygtighed blev opnået for alle de vigtigste CNS-residente celletyper.