Isolation of CNS Cell Types Using Magnetic Beads in Naive and EAE Mice

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October 6th, 2023

DOI :

10.3791/200779-v

October 6th, 2023

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Christina B. Schroeter^1*, Antonia Henes^1*, Anna Vogelsang¹, Alexander M. Herrmann¹, Stefanie Lichtenberg¹, Derya Cengiz¹, Vera Dobelmann¹, Niklas Huntemann¹, Christopher Nelke¹, Susann Eichler², Philipp Albrecht¹, Sven G. Meuth^1*, Tobias Ruck¹

¹Department of Neurology, Medical Faculty, Heinrich Heine University Duesseldorf, ²Department of Neurology, Institute of Translational Neurology, University Hospital Muenster

* These authors contributed equally

Transcript

शुरू करने के लिए, माइक्रोग्लिया और ऑलिगोडेंड्रोसाइट्स के आगे अलगाव के लिए शुद्ध, undiluted माउस सीएनएस सेल निलंबन को दो अंशों में विभाजित करें। फिर संबंधित सेल निलंबन के लिए विभिन्न सीएनएस सेल प्रकारों के लिए सतह एंटीजन के लिए चुंबकीय रूप से लेबल माइक्रोबीड विशिष्ट जोड़ें। स्तंभ को चुंबकीय क्षेत्र में रखें, स्तंभ को बराबर करें, और फिर स्तंभ पर परिणामी सेल निलंबन जोड़ें।

चुंबकीय रूप से लेबल की गई कोशिकाओं को स्तंभ के भीतर बनाए रखा जाएगा, और बिना लेबल वाली कोशिकाएं गुजरेंगी। चुंबकीय क्षेत्र से स्तंभ को हटाने के बाद, सकारात्मक चयनित सेल अंश के रूप में एक ट्यूब में स्तंभ से चुंबकीय लेबल कोशिकाओं बाहर फ्लश. न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स के आगे अलगाव के लिए ऑलिगोडेंड्रोसाइट्स से नकारात्मक प्रवाह को दो अंशों में विभाजित करें।

जीवित या मृत कोशिका भेदभाव के साथ संयुक्त सेल प्रकार विशिष्ट मार्करों का उपयोग करके फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण से माइक्रोग्लिया, ऑलिगोडेंड्रोसाइट्स, एस्ट्रोसाइट्स और न्यूरॉन्स प्राप्त हुए। विभिन्न सेल आबादी के फेनोटाइपिक लक्षण वर्णन ने साबित कर दिया कि लगभग 90% शुद्धता और व्यवहार्यता के साथ एकल सेल निलंबन सभी मुख्य सीएनएस निवासी सेल प्रकारों के लिए प्राप्त किए गए थे।

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