Om te beginnen pipetteert u 50 microliter van de geïsoleerde NET-monsters van ratten in een buis met 450 microliter Tris-EDTA-buffer. Pipeteer nu 100 microliter van de DNA-standaarden en de monsters in een plaat met 96 putjes. Voeg een gelijk volume testreagens toe aan de putjes.
Incubeer de plaat vervolgens twee tot vijf minuten bij kamertemperatuur en vermijd blootstelling aan direct licht. Plaats de plaat in een fluorescentie-microplaatlezer. Stel een emissiespectrum in van ongeveer 530 nanometer en een absorberend spectrum van ongeveer 480 nanometer.
Incubeer de cellen in één microliter van een kernkleuring gedurende 30 minuten. Incubeer vervolgens de cellen gedurende 10 minuten in één microliter celvrije DNA-stam. Meng voorzichtig de fluorescerende kleurstoffen.
Laad de monsterplaat in de cytometer. Schakel over naar het SYTOX Green-kanaal en selecteer vervolgens het HEXT-kanaal. Stel de verlichting in op Blauw 377/447 en stel de belichtingstijd in op 300.000 microseconden.
Klik op Focused Setup en klik vervolgens op Register Auto om de focus automatisch aan te passen. Selecteer het SYTOX Green-kanaal en stel de verlichting in op Green 483/536. Stel de belichtingstijd voor SYTOX Green in op 30.000 microseconden.
Klik op Scan starten om het scanproces te starten. Vergelijkbare responsen in NET-secretie waren waarneembaar tussen perifere en beenmergneutrofielen, ongeacht PMA-stimulatie. NET's voor ratten vertoonden ook beperkte mogelijkheden om met elkaar te verknopen.
Incubatie met PMA leidde tot een toename van 10% in het celvrije DNA-gehalte na vier uur, wat wijst op een grotere neiging om NET-vorming op gang te brengen.