Para começar, centrifugar o sangue humano a 120 G por 20 minutos à temperatura ambiente para remover as células sanguíneas. Em seguida, transfira a metade superior do sobrenadante para um novo tubo. Em seguida, centrifugar o plasma rico em plaquetas para remover as plaquetas e transferir a metade superior do sobrenadante para um novo tubo.
Em seguida, remova os restos celulares centrifugando a plaqueta para o nosso plasma a 13.000 G por dois minutos. Transfira a metade superior do sobrenadante para um novo tubo. Ligue o analisador de coágulos para detectar a vesícula extracelular, ou o tempo de coagulação ativado pelo EV, e pré-aqueça o instrumento a 37 graus Celsius.
Instale a sonda descartável e o copo de teste. Em seguida, inicie o procedimento de controle de qualidade da máquina. Após a execução do controle de qualidade, insira informações de amostra no sistema.
Em seguida, adicione 200 microlitros de plasma rico em EV ao copo de teste, seguido por 20 milimolares, 170 microlitros de cloreto de cálcio. Clique no botão Iniciar, feche a tampa e permita que a sonda detecte a alteração na resistência da amostra. As amostras de EV não qualificadas exibem um cluster distinto com um tamanho de partícula ligeiramente maior perto da porta de EV.In contraste, amostras qualificadas ricas em EV mostraram a maioria dos sinais dentro da porta de EV como um único grupo.
Um aumento na concentração de EV encurtou o tempo de coagulação ativado por EV, enquanto uma diminuição na concentração de EV prolongou o tempo de coagulação ativado por EV. Amostras de plasma rico em EV de pacientes com pré-eclâmpsia, fraturas de quadril e câncer de pulmão tiveram tempo de coagulação ativado por EV significativamente menor em comparação com voluntários saudáveis.