Collection of Primordial Germ Cells from Drosophila Donor Embryos

המשך לאסוף את תאי הנבט הקדמוניים או PGCs מעוברי dross filia. לאחר הרכבת מערכת מיקרו מניפולטור. תוך כדי עבודה תחת מיקרוסקופ סטריאו, השתמשו במלקחיים כדי להעביר את העוברים.

יישרו את העוברים המצופים בשתי שורות על שקופית זכוכית אוסף PGC לאורך שני קווי התייחסות. לכוון את העוברים עם הקדמי שלהם לימין והגחון כלפי מעלה. העבירו בעדינות את קצה מחט ההשתלה לקצה הקדמי של העובר.

לחדור לעובר על ידי הזזת שלב המיקרוסקופ ולמשוך מעט את המחט. כאשר הקצה מגיע לקצה האחורי. לפרוק כל עול במחט בתוך שכבת התא הסומטי.

העבירו את קצה המחט לקוטב האחורי והעמיסו בעדינות את ה-PGCs לתוך המחט מבלי לקחת הרבה זמן. משוך את המחט מהעובר במהירות. יש לפרוק חלמון ומזהמים אחרים מהמחט תוך שמירה על ה-PGC.

יש להעמיס שמן סיליקון נקי מהבריכה לתוך המחט. לפני איסוף PGCs מעובר חדש, הפקידו כמה שיותר שמן סיליקון בתוך שכבת התא הסומטי תוך שמירה על PGCs טעונים במחט. לאחר איסוף PGCs מכל העוברים ברצף, יש להפקיד את ה-PGCs על פני השטח של עובר ולפרוק כל עול או מזהמים אחרים על עובר שכן אחר.

באופן דומה, אספו ושלבו PGCs מהעוברים בשורה השנייה.