Collection of Primordial Germ Cells from Drosophila Donor Embryos

Fortsätt med att samla in de ursprungliga könscellerna eller PGC från slaggfiliaembryona. Efter montering av mikromanipulatorsystemet. När du arbetar under ett stereomikroskop, använd pincett för att överföra embryona.

Rikta in de belagda embryona i två rader på ett PGC-uppsamlingsglasglas längs två referenslinjer. Orientera embryona med framsidan till höger och ventralsidan uppåt. Flytta försiktigt transplantationsnålens spets till den främre änden av ett embryo.

Penetrera embryot genom att flytta mikroskopsteget och dra tillbaka nålen något. När spetsen når den bakre änden. Töm eventuellt ok i nålen inuti det somatiska celskiktet.

Flytta nålspetsen till den bakre polen och ladda försiktigt PGC:erna i nålen utan att ta mycket tid. Dra snabbt ut nålen ur embryot. Släpp ut äggula och andra föroreningar från nålen samtidigt som du behåller PGC:erna.

Ladda ren silikonolja från poolen i nålen. Innan du samlar in PGC från ett nytt embryo, deponera så mycket silikonolja som möjligt inuti det somatiska celskiktet samtidigt som du behåller de laddade PGC:erna i nålen. Efter att ha samlat PGC från alla embryon i rad, deponera PGC på ytan av ett embryo och lossa eventuellt ok eller andra föroreningar på ett annat närliggande embryo.

På liknande sätt kan du samla in och kombinera PGC från embryona i den andra raden.