Cryopreservation of Primordial Germ Cells Collected from Drosophila Donor Embryos

Fahren Sie mit der Kryokonservierung der primordialen Keimzellen oder PGCs fort. Nach der Entnahme und Deponierung der PGCs von den Spenderembryonen auf der Oberfläche eines Embryos. Waschen Sie die Transplantationsnadel mit einem Kryo-Schutzmittel oder CPA und geben Sie frisches CPA in die Nadel.

Geben Sie das beladene CPA zu den PGCs, die auf dem Embryo abgelagert sind, und stellen Sie sicher, dass das CPA-Volumen dem der PGCs entspricht. Entfernen Sie überschüssiges CPA ein bis zwei Sekunden nach der CPA-Zugabe aus dem PGC-Cluster. Als nächstes entleeren Sie die Nadel und beladen sie fünf Sekunden oder länger mit Silikonöl.

Geben Sie alle gesammelten PGCs in die Nadel und laden Sie anschließend erneut Silikonöl für fünf Sekunden oder länger. Stellen Sie sicher, dass die PGCs zwischen zwei Schichten Silikonöl eingebettet sind. Lösen Sie die Nadel mit weichem Seidenpapier vom Mikromanipulator, tupfen Sie das Öl von der Nadeloberfläche ab, ohne die Nadelspitze mit dem Gewebe zu berühren.

Befestigen Sie die Nadel an einem Nadelhalter und arretieren Sie sie mit Vinylband an der Basis. Frieren Sie den Halter mit der Nadel nach unten ein, indem Sie ihn in flüssigen Stickstoff eintauchen. Lassen Sie den Halter erst los, wenn die Flüssigkeit nicht mehr aus dem Gestell sprudelt.

Lagern Sie den Halter in einem Flüssigstickstoff-Vorratsbehälter im Flüssigphasenbereich.