Cryopreservation of Primordial Germ Cells Collected from Drosophila Donor Embryos

Proceder à criopreservação das células germinativas primordiais ou PGCs. Após a coleta e depósito dos PGCs dos embriões doadores na superfície de um embrião. Lave a agulha de transplante com um agente crioprotetor ou CPA e carregue CPA fresco na agulha.

Adicione o CPA carregado aos PGCs depositados no embrião, garantindo que o volume de CPA seja equivalente ao dos PGCs. Remova o excesso de CPA do cluster de PGCs um a dois segundos após a adição de CPA. Em seguida, esvazie a agulha e carregue-a com óleo de silicone por cinco segundos ou mais.

Coloque todos os PGCs coletados na agulha, em seguida, carregando novamente o óleo de silicone por cinco segundos ou mais. Certifique-se de que os PGCs estejam prensados entre duas camadas de óleo de silicone. Desconecte a agulha do micromanipulador usando papel de tecido macio, limpe o óleo da superfície da agulha sem tocar a ponta da agulha com o tecido.

Fixe a agulha a um suporte de agulha e, usando fita adesiva de vinil, prenda-a na posição na base. Congele rapidamente o suporte com a agulha apontada para baixo, submergindo-o em azoto líquido. Não solte o suporte até que o líquido pare de sair do rack.

Armazene o suporte em um tanque de armazenamento de nitrogênio líquido na área de fase líquida.