Preparation and Alignment of Drosophila Embryos for Injecting Fluorescently Labeled Antibodies

시작하려면 갓 부화한 성체 초파리 200마리를 플라스틱 원통 모양의 새장에 넣습니다. 환기를 위해 케이지의 한쪽을 다공성 금속 메쉬로 밀봉하고 다른 쪽은 과일 주스와 효모 페이스트 한천 플레이트로 밀봉합니다. 주사 당일에는 케이지의 한천 플레이트를 최소한의 효모 페이스트가 포함된 과일 주스 플레이트로 교체합니다.

배아를 채취하기 위해 섭씨 25도에서 1시간 동안 접시를 배양합니다. 그런 다음 케이지에서 판을 꺼내 알을 낳는 것을 멈추고 섭씨 25도에서 2시간 더 배양하여 2-3시간 된 배아를 얻습니다. 배아에서 달걀 껍질을 제거하려면 과일 주스 접시에 50% 표백제 용액 2ml를 넣습니다.

붓을 사용하여 접시에서 배아를 부드럽게 제거하고 접시를 2분 동안 배양하면서 30초마다 회전시켜 달걀 껍질 제거 효율성을 높입니다. 그런 다음 배아와 표백제 혼합물을 70마이크로미터 나일론 세포 여과기에 붓습니다. 남은 표백제와 효모 페이스트를 제거하기 위해 물병으로 배아를 완전히 헹굽니다.

깨끗한 면도날을 사용하여 직사각형 아가로스 블록을 자르고 블록을 유리 슬라이드에 놓습니다. 붓으로 배아를 여과기에서 젤 블록으로 옮기고 부드럽게 칫솔질하여 블록의 중심선을 따라 균일하게 분포시킵니다. 이제 두 다리를 단단히 테이프로 묶어 하나의 날카로운 끝을 만드는 핀셋을 준비합니다.

해부 현미경에서 핀셋을 사용하여 개별 배아를 선택하고 겔 블록의 확장된 가장자리를 따라 정렬합니다. 피펫 10 x 24 밀리미터 커버 슬립의 중간 지점에 헵탄 접착제 50마이크로리터. 피펫 팁을 사용하여 접착제를 0.5 x 3cm 직사각형 영역으로 펴 바릅니다.

끝이 납작한 핀셋을 사용하여 접착제 코팅된 커버 슬립을 들어 올려 배아 위로 안정적으로 잡고 접착제 면이 약 45도 각도로 배아를 향하도록 합니다. 커버 슬립을 젤 블록에 부드럽게 눌러 배아가 접착제에 닿을 수 있도록 합니다. 신속하게 압력을 해제하고 커버 슬립을 들어 올립니다.

그런 다음 신선한 유리 슬라이드 중앙에 10마이크로리터의 물을 분배합니다. 배아 베어링 커버 슬립을 그 위에 놓고 배아 면이 위를 향하도록 합니다. 그런 다음 배아 스트립의 한쪽 끝에 40 마이크로 리터의 헤일로 카본 오일을 바릅니다.

후광 탄소 오일이 배아의 표면을 덮을 때까지 슬라이드 각도를 조정합니다.