Para começar, coloque 200 drosófilas adultas recém-eclodidas em uma gaiola em forma de cilindro de plástico. Sele um lado da gaiola com malha metálica porosa para ventilação e o outro com um suco de frutas e uma placa de ágar de pasta de levedura. No dia da injeção, substitua a placa de ágar da gaiola por uma placa de suco de frutas contendo pasta de levedura mínima.
Incubar a placa a 25 graus Celsius por uma hora para coletar embriões. Em seguida, retire a placa da gaiola para interromper a postura de ovos e incube a 25 graus Celsius por mais duas horas para obter embriões de duas a três horas de idade. Para remover a casca do ovo dos embriões, introduza dois mililitros de solução de água sanitária a 50% no prato de suco de frutas.
Usando um pincel, desaloje suavemente os embriões da placa e incube a placa por dois minutos, girando-a a cada 30 segundos para aumentar a eficiência da remoção da casca do ovo. Em seguida, despeje a mistura de embrião e água sanitária em um filtro de células de nylon de 70 micrômetros. Lave os embriões de forma abrangente com uma garrafa de água para eliminar qualquer sobra de água sanitária e pasta de levedura.
Usando uma lâmina de barbear limpa, corte um bloco de agarose retangular e posicione o bloco em uma lâmina de vidro. Com um pincel, transfira os embriões do filtro para o bloco de gel e distribua-os uniformemente ao longo da linha central do bloco, escovando suavemente. Agora, prepare uma pinça com suas duas pernas firmemente presas para formar um único ponto afiado.
Sob um microscópio dissecante, escolha embriões individuais usando a pinça e alinhe-os ao longo da borda estendida do bloco de gel. Pipetar 10 microlitros de cola de heptano no ponto médio de uma tampa de 24 por 50 milímetros. Use uma ponta de pipeta para espalhar a cola em uma área retangular de 0,5 por três centímetros.
Usando um tweezer de ponta plana, levante a tampa revestida de cola e segure-a firmemente acima dos embriões, garantindo que o lado da cola fique voltado para os embriões a aproximadamente 45 graus. Pressione suavemente a tampa contra o bloco de gel, permitindo que os embriões toquem a cola. Solte rapidamente a pressão e eleve o deslizamento da tampa.
Em seguida, distribua 10 microlitros de água no centro de uma lâmina de vidro fresco. Coloque a tampa do embrião deslizando sobre ela, garantindo que o lado do embrião fique voltado para cima. Em seguida, aplicar 40 microlitros de óleo de carbono halo em uma extremidade da tira de embriões.
Incline a lâmina até que o halo de óleo de carbono cubra a superfície do embrião.