Till att börja med, fyll varje nål med fem mikroliter Alexa Fluor-märkt GFP-nanolösning. Placera ett täckglas på 25 x 25 millimeter på en glasyta. Pipettera 40 mikroliter halokarbonolja på objektglaset och sprid ut det längs täckglasets omkrets.
Under injektionsmikroskopet placerar du nålspetsen mot täckglasets kant nedsänkt i olja. Justera PicoPumps insprutningslufttryck i enlighet med detta. Byt ut det tomma glasglaset mot det förberedda Drosophila-embryoglaset.
Ställ injektionsnålens spets vinkelrätt mot embryots främre-bakre axel. Använd XY-stegmanipulatorn för att styra embryon mot nålen tills spetsen når mitten av äggulan, och pumpa två till tre gånger för att infundera antikroppar i äggulan. Med XY-stegmanipulatorn styr du embryon bort från nålen efter injektionen och går vidare till nästa embryo.
Låt embryona inkubera vid 25 grader Celsius tills de når önskat utvecklingsstadium. Efter inkubationen, identifiera embryona under en lins med låg effekt med ljusfältsbelysning och byt till en 40X eller 63X lins för högupplöst fluorescerande levande avbildning. Efter injektionen förbättras signal-brusförhållandet för notch-receptorn signifikant jämförbart med signalkvaliteten för immunofluorescens.
Dessutom möjliggjorde antikroppsinjektion temporal karakterisering av lokalisering av skåror med 45 sekunders intervall utan en uppenbar förlust av signalintensitet under ett fem minuters avbildningsfönster. Levande avbildning av embryonalt fosfotyrosin visade att tyrosinfosforylering är starkt anrikad vid de tricellulära korsningarna. Dessutom observerades en ny andra population av fosfotyrosinsignal under mitten av det apikala membranet.
Tvåfärgsavbildning avslöjade att denna population av fosfotyrosinsignal är nära medialt myosin. Dessutom uppvisade den mediala populationen av fosfotyrosin liknande pulserande koalescens- och avledningsmönster, vilket visas för medialt myosin.