För att börja avvaxa tidigare förberedda paraffinsektioner av Peyers plåster isolerade från immunglobulin A eller IgA neuropatimodellmus, sänk ner varje sektion sekventiellt i xylen- och etanolgradienter i fem minuter. Skölj sedan sektionen i destillerat vatten. För antigenuttag, värm natriumcitratlösning i två minuter i en autoklav.
Lägg sedan vävnadsskivan i lösningen och värm den vid hög temperatur i fem minuter. När den har svalnat, inkubera sektionen i en 3% väteperoxidlösning i 15 minuter vid rumstemperatur borta från ljus. Applicera sedan 10%goat serum jämnt på vävnadssektionen och inkubera i 30 minuter i rumstemperatur för att blockera sektionen.
Efter att ha skakat av den blockerande lösningen, applicera en lämplig mängd av den beredda primära antikroppen på varje sektion. Inkubera sektionerna som ligger platt i en våt låda över natten vid fyra grader Celsius. Nästa dag, täck vävnaden med en droppe av den HRP-märkta sekundära antikroppen och inkubera den i rumstemperatur i 50 minuter.
Applicera sedan nyberedd DAB-kromogen lösning på varje sektion och vänta tills färgutvecklingen har utvecklats. Färga om sektionen med hematoxylin i cirka en minut. Skölj sedan sektionerna i 10 minuter med kranvatten tills de återgår till en blå färg.
För uttorkning, placera varje sektion sekventiellt i gradienter av etanol och xylen i fem minuter vardera. När alla sektioner har torkat något, försegla varje sektion med neutralt tuggummi. Immunhistokemiska resultat visade att B-cellsmarkörerna CD20 och CXCR5-uttryck var signifikant högre i gruppen som fick IgA-neuropati jämfört med kontrollgruppen.
Dioscin kan dock hämma uttrycket av de molekylära markörerna.
