首先,将 150 毫升干净的 5 毫米玻璃珠加入干净的罐子中并盖上盖子。用足够的铝箔盖住封闭的罐子,以隐藏盖子到罐子连接处,并在 121 摄氏度下高压灭菌 20 分钟。当幼苗准备好转移到无菌工作台上的罐子中时,取下铝箔和罐盖。
在罐子中加入 35 毫升 pH 值为 5.7 至 5.9 的半强 Murashige 和 Skoog 培养基,搅拌珠子以均匀涂覆在培养基上。将三到五棵幼苗引入罐子中,确保根系放置在玻璃珠之间。用无菌镊子或勺子调整珠子以覆盖根部并将叶子从培养基中取出。
将两条 1.25 厘米的微孔胶带固定在罐子顶部,然后轻轻地将盖子放在顶部。用 2.5 厘米的微孔胶带密封盖子和罐子之间的间隙,以保持无菌,同时允许空气交换,然后将罐子放入生长室中。当植物达到所需的年龄时,从罐子中取下微孔胶带和盖子。
将 20 μL 生长培养基等分到 LB 琼脂板上进行无菌测试。使用 25 毫升容量移液器,在不损坏根部的情况下去除尽可能多的生长培养基。沿罐壁加入 50 毫升收集介质,以防止弄湿叶子。
盖上盖子盖住罐子,在无菌条件下孵育两个小时。孵育后,将所需量的收集培养基移入试管中。测量根部的重量,并在一个罐子中从植物中射出,以按植物重量使根部分泌物正常化。
拟南芥植物在两个不同的实验室看起来很健康。玻璃罐系统被证明适用于各种植物物种和发育阶段。小麦的溜槽重量最高,其次是高粱和番茄。
高粱的根重最高,其次是小麦和蒺藜。用共生细菌接种拟南芥不会改变植物表型,接种的细菌在系统中持续存在至少 12 天,菌落形成单位略有增加。