Begynd proceduren ved at oprette immobiliseringsdivots i agarose. For at gøre dette opvarmes og blandes 2% agarose i PBS ved hjælp af en mikrobølgeovn, indtil opløsningen er flydende. Pipette 250 mikroliter af den flydende agarose i en skål med glasbund.
Og brug en fleksibel plastdæksel til at flade agaroseen over fadet. Når agarosen er afkølet og størkner helt, skal du bruge pincet med fin spids til at fjerne dæksedlen. Brug derefter en tre millimeter biopsistans til at skabe et hul i agarosen i midten af skålen.
Ved hjælp af en delikat opgavetørring fjernes overskydende agarose. Opbevar agaroseformen, hydreret med PBS, ved fire grader Celsius indtil brug. Før montering af den isolerede spejlende okulære linse tilsættes to ml af det passende medium til den fremstillede agaroseform, afhængigt af linsetypen.
Brug embryotang til forsigtigt at overføre den faste eller levende linse til divoten i agarose. Placer derefter skålen på et omvendt mikroskoptrin. Bekræft, at linsen er placeret med det forreste område, der vender mod målet, ved at visualisere kernefarvning.
Hvis der ikke observeres kerner, skal du bruge buede tang til forsigtigt at dreje linsen ca. 180 grader, så det forreste område vender mod målet. Fortsæt derefter med at erhverve billeder ved hjælp af et konfokalmikroskop. Til visualisering af linsekapsler skal du erhverve Z-stack-billeder ved hjælp af en 40x målsætning med en trinstørrelse på 0,3 mikron.
Få det første billede før overfladen af linsekapslen, angivet ved WGA-farvning, og det sidste billede efter epitelcellernes apikale overflade. For at visualisere epitelceller skal du erhverve Z-stack-billeder ved hjælp af et 63x-mål med en trinstørrelse på 0,3 mikron.