Begin met de hele voorbereiding van de vatting van de vaste lens door immobilisatie-agarosewiggen te creëren. Neem hiervoor een schaal met glazen bodem en giet er ongeveer vijf tot zes milliliter gesmolten 2% agarose, in PBS, in. Wacht tot de agarose stolt.
Gebruik vervolgens een scherp mes om een driehoekige divot in de gestolde agarose te maken. Verwijder de agarosewig en voeg een milliliter PBS toe aan het gerecht. Zuig eventuele resterende agarose op die na het snijden is achtergebleven.
Maak indien nodig meerdere wiggen in één schaal om op meerdere lenzen te passen. Om de mal op te bergen, voegt u er een milliliter PBS aan toe voordat u deze op vier graden Celsius houdt. Plaats de lens met een gebogen pincet in de agarosewig met één milliliter PBS.
Stel de lens zo af dat het equatoriale gebied naar beneden op het microscoopglas wijst wanneer deze boven het confocale objectief wordt geplaatst. Plaats de schaal op de microscooptafel. Om te bevestigen dat het equatoriale gebied scherp is, visualiseert u de kernen en zorgt u ervoor dat ze in rijen zijn uitgelijnd.
Controleer ook de onregelmatig opeengepakte en gevormde equatoriale epitheelcellen en de nauwkeurig uitgelijnde en zeshoekige meridionale rijcellen, aangegeven door F-actinekleuring op de celmembranen. Een willekeurige opeenhoping van de kernen in het gezichtsveld geeft aan dat de lens naar voren gericht is naar het objectief. Als kernen niet kunnen worden waargenomen, geeft dit waarschijnlijk aan dat de achterkant van de lens naar het objectief is gericht.
Gebruik in dergelijke gevallen een gebogen pincet om de lens te draaien totdat de nauwkeurig uitgelijnde kernen op de evenaar van de lens worden waargenomen.