Pour commencer, enduire la membrane de la plate-forme de culture cellulaire reconfigurable assemblée de cinq microgrammes par centimètre carré de fibronectine pendant une heure à température ambiante pour améliorer la fixation des cellules. Ensuite, à l’aide d’une pipette p200, aspirez la solution d’enrobage. Placez le pochoir de motif dans le puits du module principal.
Ajoutez des supports cellulaires au puits et au canal inférieur de l’appareil. Semez des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine dans le puits. Placez l’appareil dans une boîte de Pétri.
Ajoutez un bouchon de tube conique de 15 millilitres contenant de l’eau déminéralisée dans la boîte de Pétri pour maintenir l’humidité locale. Transférez la configuration de la boîte de Pétri dans l’incubateur. Pour cultiver les cellules sous flux, procédez à la reconfiguration de la plate-forme du mode puits ouvert au mode microfluidique.
Pour ce faire, remplissez les réservoirs et les tubes avec un milieu de croissance des cellules endothéliales. Placez le boîtier inférieur sur la platine d’échantillonnage. Insérez le module à noyau ouvert dans le boîtier inférieur, puis retirez le pochoir, aspirez le support cellulaire du puits du module et placez le module d’écoulement dans le puits.
Ensuite, placez le boîtier supérieur pour sceller le module de flux dans le puits du module principal. Connectez les pointes de distribution d’entrée et de sortie aux ports du module de débit. Démarrez la pompe péristaltique pour introduire un écoulement de fluide dans le système.
Arrêtez la pompe lorsque le temps souhaité pour l’exposition au débit est atteint. Retirez les embouts de distribution d’entrée et de sortie, puis retirez le boîtier supérieur. Retirez délicatement le module d’écoulement du puits à l’aide d’une pince à épiler.
Enfin, ajoutez 100 microlitres de milieu cellulaire dans le puits avant d’effectuer le test souhaité. Les cellules cultivées sous flux, alignées le long de la direction d’écoulement, tandis que les cellules cultivées sans flux sont restées orientées de manière aléatoire. L’exposition des cellules à un stress pur a entraîné la régulation positive du facteur 2 de type Kruppel et de l’oxyde nitrique synthase endothélial, qui jouent un rôle essentiel dans la santé des vaisseaux sanguins.