首先将分离的小鼠脑组织放入每个大脑1毫升的消化缓冲液中,放在冰上的单独培养皿中。使用干净的手术刀刀片将脑组织彻底切成小块。使用吸头切断的塑料移液管,小心地将切碎的大脑转移到冰上 24 孔板内的单个孔中。
用一大块透明柔性薄膜盖住板,盖上盖子,在冰上孵育 30 分钟。接下来,将消化的大脑溶液转移到含有 5 毫升冷 FACS 缓冲液的冰上单独的 7 毫升冰玻璃 dounce 均质器中。用松散的杵轻轻弹动每个大脑,直到获得单细胞悬浮液。
在转移到 15 毫升聚丙烯管之前,用紧密的研杵轻轻蘸三到四次以确保单细胞悬浮液。