Начните с добавления 2,125 миллилитров изотонического градиента плотности в 15-миллилитровую полипропиленовую трубку, содержащую гомогенат мозга мышей. Долейте до конечного объема 8,5 миллилитров каждую трубку с помощью буфера факса. Аккуратно переверните трубки 20 раз, чтобы тщательно перемешать.
С помощью узкой градуированной переводной пипетки аккуратно нанесите четыре миллилитра розового цвета с градиентом плотности 37%, создав два чистых слоя. Переключите переводные пипетки и нанесите подложку на два миллилитра синего цвета с градиентом плотности 70% ниже слоя 37%. Поместите пробирки в центрифугу, охладите до четырех градусов Цельсия и вращайте их при 500 G в течение 20 минут, установив рампу торможения на самую низкую настройку.
После центрифугирования выбросьте миелин из верхней части 15-миллилитровой пробирки с помощью чистой переводной пипетки. Аккуратно соберите верхний фрагмент градиента плотности в чистую полипропиленовую пробирку объемом 15 миллилитров с помощью другой переводной пипетки. Затем соберите все клетки в образце, медленно вращая пипеткой по бокам пробирки, собирая иммунно обогащенный фрагмент.
Перенесите обогащенный иммунитетом фрагмент в новую полипропиленовую трубку объемом 15 миллилитров. Промойте образец, добавив в пробирку 10 миллилитров факса. Аккуратно переверните трубку 20 раз, чтобы тщательно перемешать.
Вращайте пробирки в охлаждаемой центрифуге с тормозной рампой, установленной на самое низкое значение, чтобы гранулировать изолированные иммунные клетки.