शुरू करने के लिए, छह अच्छी तरह से टिशू कल्चर व्यंजन के कुओं में बाँझ coverslips जगह और कुओं में पाली L-Lysine और टुकड़े टुकड़े समाधान की एक पर्याप्त मात्रा डालना coverslip को कवर करने के लिए. अगला, वाष्पीकरण को कम करने के लिए प्लास्टिक की चादर के साथ प्लेट को सील करें, और रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। अगली सुबह, बाँझ पीबीएस के साथ coverslips तीन बार धो लें.
कवरस्लिप युक्त प्रत्येक अच्छी तरह से 10, 000 कोशिकाओं को प्लेट करने के लिए सेल निलंबन और विकास मीडिया के दो मिलीलीटर जोड़ें। पीबीएस के साथ coverslips धोने के बाद, 18 मिनट के लिए एक 4% paraformaldehyde समाधान और पीबीएस के साथ कोशिकाओं को ठीक. इम्यूनोस्टेनिंग से पहले पांच मिनट के लिए पीबीएस के साथ तीन बार कवरस्लिप कुल्ला।
10 मिनट के लिए Hoechst डाई के एक से पांच माइक्रोग्राम में immunostained और धोया coverslips सेते हैं. फिर एक अतिरिक्त पांच मिनट के लिए पीबीएस के साथ coverslips धो लें. पीबीएस और ग्लिसरॉल मिश्रण के बराबर अनुपात का उपयोग करके स्लाइड माउंट करें और फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके छवियों को कैप्चर करें।
30 सेकंड से एक मिनट के लिए एक गैर-एंजाइमेटिक सेल पृथक्करण समाधान के साथ कोशिकाओं का इलाज करें। फिर गैर-एंजाइमी सेल पृथक्करण अभिकर्मक के हर एक मिलीलीटर के लिए डीएमईएम के पांच मिलीलीटर जोड़ें। हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करके कोशिकाओं की गणना करें।
पांच मिनट के लिए 5G पर कोशिकाओं को अपकेंद्रित्र करें। डीएमईएम के प्रति 100 माइक्रोलीटर छठी कोशिकाओं के एक से दो गुना 10 की एकाग्रता में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें। अपने पेट पर पशु रखें और 70% इथेनॉल के साथ इंजेक्शन साइट निष्फल है.
सही पार्श्व में चमड़े के नीचे छठी कोशिकाओं के एक से दो गुना 10 इंजेक्षन. माउस को अकेले बिस्तर मुक्त पिंजरे में रखें और इसे ठीक करने की अनुमति दें। हाइपोथर्मिया को रोकने के लिए, पिंजरे के एक हिस्से को हीटिंग पैड पर रखें।
प्रारंभिक मार्ग P0 GGF बीटा 3 MPNST कोशिकाओं की निम्न और उच्च शक्ति छवियां दिखाई गई हैं। कोशिकाओं को ट्यूमरजेनिक पाया गया, जो नरम अगर में कालोनियों का निर्माण करता है और इम्यूनोडेफिशिएंसी चूहों में ग्राफ्ट करता है।