Arabidopsis thaliana | Esterilização e Cultivo de Superfícies de Sementes em Câmara de Crescimento

Para começar, adicione as quantidades necessárias de sementes de arabidopsis thaliana Columbia zero em um tubo de microcentrífuga de dois mililitros. Para esterilização superficial das sementes, adicionar etanol a 70% ao tubo por dois minutos e agitar suavemente o tubo. Após a retirada do etanol, lave as sementes com água estéril por cinco minutos.

Retire a água do tubo e deixe as sementes sedimentarem para o fundo do tubo por gravidade antes de remover a água restante. Para criar uma suspensão de água de sementes, adicione um volume igual de água estéril ao tubo que contém as sementes. Usando uma ponta de pipeta larga, distribua uniformemente aproximadamente 30 a 40 sementes seguidas em cada área na placa média seguindo uma grade de semeadura.

Deixe a água secar nas sementes por 30 minutos. Sele a placa com fita adesiva de micropore e envolva-a em papel alumínio. Estratificar as sementes por três dias a quatro graus Celsius no escuro para superar a dormência e promover germinação uniforme.

Em seguida, desembrulhe o papel alumínio da placa e transfira a placa com sementes estratificadas para a luz branca por uma hora para induzir a germinação. Embrulhe a placa com papel alumínio após o tratamento leve para proteger as sementes da luz. Coloque a placa em posição vertical em uma câmara de crescimento e cultive-a por quatro dias no escuro a 21 graus Celsius.